中空纤维切向流过滤 收获 amp; 浓缩病毒样颗粒.pdfVIP

应用 笔记 中空纤维切向流过滤 收获 浓缩病毒样颗粒 简介 都有所欠缺。 病毒样颗粒（VLP）具有与天然病毒相似的衣壳结 切向流过滤（TFF ）的原理是将料液切向泵过分离 构，而没有病毒的遗传物质，其微粒状形态使其具 膜表面，在按粒径高效分离料液的同时，可避免料 有良好的免疫源性，且其无自主复制能力，降低了 液内容物在膜表面积聚，减缓膜堵塞。TFF 用膜主 感染风险，所以被认为极具疫苗开发潜力，已用于 要包括平面膜包和中空纤维（HF）两种形式，而 HEV、HIV、HPV、SARS、流感等疫苗的研发。 HF 在通量、剪切控制、规模放大便利性以及成本 投入方面具有诸多优势。 VLP 生产常使用杆状病毒-昆虫细胞表达系统，其 上游构建技术已相对成熟，但下游生物工艺仍是一 实验 个难题。VLP 的下游制备工艺包括澄清回收和浓缩 本文使用 KrosFlo 研发用 IIi 切向流过滤系统纯化 等步骤，前者是指从含有细胞碎片、细胞器、不完 HIV-VLP ，表达系统为杆状病毒-Sf9 昆虫细胞，采 整 VLP、杆状病毒及培养基成分的培养液中回收 用无血清培养基（SFM）培养。起始澄清及回收操 VLP ，该步操作难度取决于VLP 的特性，如颗粒大 作时，系统配用0.45μm HF 过滤组件（产品编号： 小、密度、是否有包膜、表面生化特性，以及培养 P-C02-E45U-05-N ；膜材质：改性聚醚砜 mPES ； 基的复杂程度，其中VLP 包膜极其脆弱，易被剪切 2 膜表面积：20cm ；纤维数量：6 ；纤维内径：0.5mm ； 力损坏，但其对保持VLP 的免疫源性又极为重要， # 有效纤维长度：20cm）和 14 PharmaPure 软管， 这一点也同样会影响后续的浓缩操作。 处理量为 200ml 细胞培养液。操作时，先用 PBS 缓冲液冲洗润湿 HF 组件，然后料液循环过滤，并 常用的VLP 回收和纯化方法包括超速离心、聚乙二 通过KF Comm 数据采集软件对流速、剪切、跨膜 醇沉淀、离子交换及亲和层析等，但各种方法在稳 压（TMP ）、起始料液浓度等进行记录、分析和优 定性、高效性、可重复性以及规模放大可行性方面