不同金属离子对酶活性的影响.docVIP

金属离子对酶活性的影响 实验目的：1、了解金属离子对酶活性的影响； 2、掌握不同金属离子对酶活性作用结果的测量方法 实验原理： 酸性磷酸酯酶广泛分布于动物和植物中，植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中。它对生物体核苷酸、磷蛋白和磷脂的代谢，骨的生成和磷酸的利用，都起着重要作用。磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。 本实验选用绿豆芽作材料，从中提取酸性磷酸酯酶。以人工合成的对硝基苯磷酸酯（NPP）作底物，水解产生对硝基苯酚和磷酸。在碱性溶液中，对硝基酚盐离子在405nm处光吸收强烈，而底物没有这种特性。凡是能提高酶活性的物质统称为酶的激活剂。无机离子和一些金属离子对酶有激活作用，可以作为酶的激活剂。其中钾离子是酸性磷酸酯酶的一种激活剂，它在酶与底物之间起了桥梁作用，形成了酶—金属离子—底物三元复合物，从而更有利于底物与酶的活性中心部位的结合。而氯离子和钠离子对酸性磷酸酯酶的活性没有什么影响.一些重金属离子如铜离子，对酶活性具有抑制作用。 实验用品： 仪器：恒温水浴箱、试管架、试管、分光光度计、比色皿、吸头、滴管、移液枪、移液管 试剂：1.2mmol/L NPP 100ml 、 0.3mol/L NaOH 250ml 、 酸性磷酸酯酶、 pH5.0的柠檬酸缓冲液1000ml 、2mmol/L FeSO4 、2mmol/LCuSO4、MnCl22mmol/L 、MgSO42mmol/L、 KCl 2mmol/L EDTA、 实验步骤： 调零 FeSO4 CuSO4 MnCl2 MgSO4 EDTA KCl 空白对照 0 1 2 3 4 5 6 7 NPP（ml） 1 1 1 1 1 1 1 1 酶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 金属离子 （ml） 1 1 1 1 1 1 1 1 NaOH(ml) 3 3 3 3 3 3 3 3 注：反应均在37度水浴箱中进行， 0号管先加入1.0mlNPP后保温15分钟，然后加入NaOH 3ml，混匀后再加酶液1ml，在波长405nm处观察OD值，以0号管调零 实验结果 调零 FeSO4 CuSO4 MnCl2 MgSO4 EDTA KCl 空白对照 试管号 0 1 2 3 4 5 6 7 OD（abs） 0 0.684 0.309 1.262 0.357 0.341 0.342 0.284 由实验数据得到的图标如下： 实验作业： 以各金属离子为横坐标，A405纵坐标，绘制不同金属离子与酶活力曲线，观察金属离子与酶活力的关系，分析哪些是酶活性激活剂，哪些是酶活性抑制剂。 结果分析：通过实验组与对照组的OD值对比可知，保证在适宜的温度、pH等外界条件下，再加入1ml 2mmol/L浓度的各种金属离子溶液，对酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用。它们对酸性磷酸酯酶激活作用的强度由大到小依次为：MnCl2、FeSO4、MgSO4KCl 、EDTA、CuSO4。可以看出，重金属对这种酶的激活作用比较强。