超分子静电自组装制备新型葡萄糖生物传感器.pdfVIP

超分子静电自组装制备新型葡萄糖生物传感嚣 超分子静电自组装制备新型葡萄糖 生物传感器 黄亮1，韩松岩1，刘东波1，韩君1，史海滨1，吴宝艳1，陈强 l生物系．南开大学，中亘天津300071，联系电ig：022- e-mail：biosensor@ey．ou．com [摘要】研究工作以葡萄糖氧化酶和具有良好生物相容性的壳聚糖为材料，采用静电自组装方 法制备多层累积膜固定化酶，制各了一种新型的葡萄糖生物传感器。壳聚糖具有良好生物相容 性可以保持酶的活性，可延长传感器的使用寿命。通过静电自组装方法增加组装层数提高传感 器中被固定酶的量，增加酶和底物接触的表面积，从而降低传感器的检出浓度，提高灵敏度。 分析了壳聚糖溶液的离子强度、pH值和分子量等因素对多层累积薄膜的形成和GOx固定化效 果的影响。用晶体石英微天平(QcM)原位研究了组装动力学过程。 [关键词]多层膜累积技术壳聚糖晶体石英微天平 1．实验步骤 图一表示聚电解质分子的结构式。 PSS 魄oH萨恕鲰泸寸 图一实验中使用的化学试剂的结构式 QCM基片预处理过程：将lOOmg 的溶液。然后进行如下自组装过程：1．将清洗过的QCM基片浸在PDDA溶液中20min；2．用 次，在QCM基片表面形成(PDDA／PSS)3复合膜。 中配成2mg／ml聚阴离子溶液。静电自组装过程如下：1．将预处理过的QCM基片浸入壳聚糖 复过程1—4。 实验过程中用NaOH和HCl溶液调节壳聚糖溶液的pH值，采用常规的三电极测试系统， 第八届全国敏感元件与传感器学术会议论文集 电极电位为o．6v下测定电流响应，并缓慢搅拌。在N2环境下测定循环伏安曲线(cV)，扫描速 度50mv／s。在电化学测试过程中用O 1MpH6．8的磷酸缓冲溶液配制测试溶液。所有的测试均 在室温下进行。 2．结果和讨论 2．1吸附过程的动力学研究 实验中利用QCM测定吸附过程中的频率变化原位研究壳聚糖(cs)和GOx吸附动力学过 程。图二为(CS／GOx)。在基片和电极表面累积示意图。 图二(CS／GOx)。在基片／电极表面累积示意图 图三是一个典型的CS和GOx吸附动力学过程中频率与时问的关系。图三(1)表示cs 在GOx薄膜表面吸附过程(曲线a)和随后水洗过程(曲线b)的频率变化。从曲线a中可以看到 QCM共振频率随时间逐渐减小，说明cs逐渐吸附到了QCM电极表面；曲线b随时间上升 说明一部分吸附到表面的Cs被洗掉。图三(2)表示GOx在cS薄膜表面吸附和解附过程， 与图三(1)过程相类似。 图三CS和G0x组装过程中的QCM频率的变化： (1)cs在G0x膜上组装过程；(2)(30x在cs膜上组装过程 数值也不同，如蛋白质和聚阴离子吸附的T为5．7mitlllj，硅胶体颗粒与聚电解质吸附的t不到 5s“1。由于静电吸引作用，吸附过程起初进行的非常快，并在很短的时间内就可以达到80-90％， 但是对于整个完整的吸附过程而言，还需要一些时间来进行缓慢的构象调整并达到吸附物质与 浸渍液中物质动态平衡。 基片的频率变化1Hz相当于有0．056ng／mm2聚电解质吸附到基片表面，因此每组装一次在电极 整坌±兰皇!丝茎型鱼堑型堕苎塑圭竺堡垒墨—— 表面吸附的CS和GOx的表面密度分别为7．28和6．72ng／mm2。假定蛋白质的密度为1．39／cm3， 并且静电自组装所形成的GOx薄膜是致密而均匀的覆盖在电极表面上，可以计算出GOx层的 平均厚度大约为5．16nm。由于实际上形成的GOx层并不能loo％的将电极表面覆盖，因此这个 结果并不能表示GOx层的真实厚度，但是这个结果可以证明在带有正电荷的电极表面确实形成 了一层GOx单分子膜。致密的单分子酶层最大表面浓度可以通过下式计算出来：