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单细胞传感器的设计与实验研究 许改霞秦利锋徐莹李艳李蓉王平’ 濒江大学生物医学I程s仪器科学学院．生物传感器国家专监实验室。 1590信箱，杭纳．310029联系电ig：0571 e—mail：xugaixia@ziu．cdu．en 【摘要]细胞传感器是生物传感器研究中的一个热点，它利用活细胞作为探测单元，可以测量 被分析物的功能性信息。细胞传感器灵敏度高、选择性好、响应迅速，在生物医学、环境监测 和药物开发中有广泛的应用。我们实验室在早期细胞微生理计研究的基础上，设计了一种基于 LAPS的细胞传感器，用它来检测在药物作用下，神经细胞的胞外动作电位变化，本文主要阐 明在细胞培养固定和测量参数方面所做的改进。 【关键词]单细胞传感器LAPS生物传感器 引言 细胞上的生化受体直接或间接与离子通道相互作用，引起通过细胞膜的电流的变化，这种 信号与微电子器件的耦合能够使我们设计出对生物、环境或者药物试剂具有高度选择性的生物 传感器，所以，只要检测设备精度和稳定性足够高，细胞就可以作为生物传感器的敏感元件。 而且，通过合理设计，可能实现控制电路和神经系统双向通讯，对研究神经活动机理也具有极 大的意义。 细胞内生理状态改变，会引起细胞外代谢物(如离子、生物大分子等)的相应变化。因此， 测量细胞胞外微环境的相关参数，可以问接监测细胞的生理变化。常用的胞外测量方法有：应 子浓度的变化，推导出细胞内发生的一些简单的生化反应…：或者，也可以用基底集成的微电 极阵列来检测胞外电压“。。然而，这些技术都有一个共同的局限性，即由于检测元件几何外形 带来的限制，只能在传感器表面固定位点上进行测量”o。 20世纪90年代，美国分子器件公司(MolecularDevice Corporation)把芯片技术引入生 器检测细胞酸化的微环境。细胞由于能量代谢产生酸性物质，使外环境酸化，利用光寻址电位 传感器(LightAddressablePotential Sensor，LAPs)可以测量细胞外微环境的pH值变化， 定量计算细胞质子(H+)排出速率，从而可以分析细胞的代谢率，这种方法对糖酵解和呼吸作用 的代谢过程都适用。最重要的是，LAPS克服了测量位点固定的缺点，它的光点是可移动的， 可以定位于合适的位置来进行测量，而且通过选择适当的激光器，使光点足够小，就可以对单 个细胞进行测量。我们实验室在早期细胞微生理计研究的基础上，设计了这种细胞传感器 (cell—based biosensor)，在细胞培养固定和测量参数方面做了改进，以期检测在特定药物作 用下单细胞电位的变化情况，最终达到药物筛选的目的。 ·联系人：杭州市，渐江大学(玉泉校区)生仪学院，1590信箱(邮编：310027)，王平 第八届全国敏感元件与传感器学术会议论文柴 __●-___●-_______●__●________●-_________________—_-—__________——___________—————-————————— 1．LAPS工作原理 LAPS具有空间分辨率，并对表面电压和照射光强度敏感。以一定波长光照射硅片表面的 局部，会诱发局部光电流，它的幅度依赖于局部表面电压。根据LAPS的这一特性，可以通过 移动照射硅片的光源，随意选择令人满意的测量位点。图1是LAPS对偏置电压变化的响应曲 线。 薯 舒 删 矧 ■ 图1LAPS对电压变化的响应曲线 优化LAPS的结构，提高它的稳定性和敏感性，我们就有可能测量到单个细胞动作电位的 微小变化。 测量过程基本是：药物作用于细胞，细胞发生生化反应，各种离子进出细胞膜，引发动作 电位。用频率为10KHz的红外调制光照射LAPS表面，将产生与细胞表面动作电位变化成比例