应用PCR-SSCP检测先天性软骨发育不全患者.pdfVIP

维普资讯 中国实用医药 2008年3月第3卷第 9期 ChinaPracMed，Mar2008，Vo1．3，No．9 · 25 · 应用 PCR—SSCP检测先天性软骨发育不全患者 王丹鹤 赵心 吴俣 朱霄鹤 【摘要】 目的 应用PCR-Single-Strondedconformationpolymorphism(PCR-SSCP)技术对先天性软骨 发育不全患者进行检测 。方法 对 3例疑似先天性软骨发育不全患者、1例确诊患者应用基 因组 DNA 聚合酶链反应-单链构象多态技术进行检测。结果 3例疑似患者中2例出现和确诊患者同样的异常泳 带，此泳带在正常人中不存在。结论 PCR-SSCP技术可实现对先天性软骨发育不全患者的检测。 【关键词】 先天性软骨发育不全；聚合酶链反应；单链构象多态 DetectionofachondroplasiabyPCR·SSCP ZHAO Xin，WU Yu，ZHUXiao-he． A【bstract】 0bjective TodetectionachondroplasiabyPCR-SSCP．Meth0ds ThegenomicDNAfrom 1clinicallydiagnosedachondroplasiapatientand3suspiciouspatientswithachondroplasiawasdiagnosed by polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism(PCR—SSCP)．Results 2in3suspicious patientswithachondroplasiahavehtesameabnormal band，whichdoesnotexistinnomr alpeople．Conclusion PCR-SSCPcanbeusedhtediagnosisofachondroplasia． 【Keywords】 Achondroplasia；Polymerasechainreaction；Single-Strondedconfomrationpolymorphism 先天性软骨发育不全(achondroplasia，ACH)是小儿遗传性 增产物 。 侏儒症中最常见的类型，在活产婴儿中的发病率为 1／15000— 1．2．4 单链构象多态性分析 取 PCR产物 5 l，加入等体积 1／77000，为常染色体显性遗传，无家族史，约80％患者为散发 的变性液 (95％甲酰胺，20mmol／LEDTA，0．o5％二 甲苯蓝， 型。表现为短肢型身材矮小，头大，前额和顶骨圆凸，鼻梁下 0．o5％溴酚蓝)混匀，97℃变性 10min，使 PCR产物解为单链 ， 陷，腰椎前凸，弓形腿，“V”字形手等。至今 已发现ACH的3 立即将解链产物置冰浴中骤冷5min。将此变性产物加入 12％ 种基因突变，均位于FGFR3跨膜区，多数为 1138位核苷酸的 非变性聚丙烯酰胺凝胶 (49：1)中，室温 100V恒压垂直 电泳 G—A转换，少数为G—C颠换，还有个别为 1123位核苷酸的 200min。待溴酚蓝走至胶底，二 甲苯蓝走至约2／3胶长时，停 G~T颠换 。 止电泳。溴化乙锭染色，紫外灯下检测 电泳条带并照相。 1 对象与方法 2 结果 1．1 对象 沈阳市中国医科大学第二附属医院儿科遗传 门 2．1 PCR扩增产物鉴定结果 PCR产物经琼脂糖凝胶 电泳 诊的3例疑似ACH患者、1例确诊患者和 1名无ACH家族史 后，观察证实每一标本都扩增出来。 的正常人 。 2．2 单链构象多态性分析结果 样品DNA经 SSCP分析，3 1．2 方法 例疑似 ACH患者 中发现P1、P2存在