总黄酮总酚含量测定方法.docVIP

太行菊的抗氧化活性试验计划 1. 实验内容 对太行菊的甲醇提取物的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水共六种萃取物进行总酚、总黄酮含量的测定，分析实验结果，选择总分和总黄酮含量比较高的两个层分进行抗氧化能力测定，分析其抗氧化能力强弱，判断其有无研究价值。 用Folin-Denis法测定太行菊甲醇提取物各萃取层组分的总酚含量，以没食子酸作为标准品进行对照。用三氯化铝法测定太行菊各萃取层组分的总黄酮含量，以槲皮素作为标准品进行对照。根据实验结果，选择总酚和总黄酮含量较高的萃取层组分进行抗氧化能力测定，包括DPPH自由基清除能力测定，羟基自由基清除能力测定，还原能力测定。 2.实验步骤 将太行菊用甲醇溶液回流提取其有效成分，旋转浓缩后用水溶解，然后分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取、水层，得相应层的馏分。 2.1总酚含量测定：在试管中分别加入不同层样品（1mg/ml）0,25ml +Folin-Denis试剂0.5ml ，5 min后，再加入Na2CO3饱和溶液0.5ml,并做三组重复。对照组中样品和Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。空白组中Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。在760nm紫外光下测定吸光度。 对实验结果处理后做标准曲线，以没食子酸为标准品。 以没食子酸的微克数表示总酚含量:吸光度=0.0069 μg没食子酸－0.042。 Folin-Denis试剂的配制：在2L烧瓶中加入750ml蒸馏水，再加入100g钨酸钠和20g磷钼酸，再加入50ml正磷酸回流2h, 冷却后装入1L容器内置于暗处 实验组*3: 体积 Folin-Denis的体积 Na2CO3 MEOH层 0.25ml 0.5ml 0.5ml H层 0.25ml 0.5ml 0.5ml CH层 0.25ml 0.5ml 0.5ml EA层 0.25ml 0.5ml 0.5ml BUOH层 0.25ml 0.5ml 0.5ml W层 1 2 2 对照组*3： DW DW Na2CO3 体积 0.25ml 0.5ml 0.5ml空白组*3： 体积 DW的体积 Na2CO3 MEOH层 0.25ml 0.5ml 0.5 ml H层 0.25ml 0.5ml 0.5 ml CH层 0.25ml 0.5ml 0.5ml EA层 0.25ml 0.5ml 0.5ml BUOH层 0.25ml 0.5ml 0.5 ml W层 0.25ml 0.5ml 0.5ml 2.2总黄酮含量测定：在试管中分别加入不同层样品(1mg/ml) 0.5ml + 1M CH3COOK溶液0.1ml + DW 2.8ml + 95%乙醇1.5ml + 10% AlCl3·6H2O溶液0.1ml，并做三组重复。对照组中样品和AlCl3·6H2O溶液用DW代替，其他不变。空白组中AlCl3·6H2O溶液用DW代替，其他不变。所配溶液在室温下放置40分钟后在510nm紫外光下测定吸光度。 对实验结果处理后做标准曲线，以槲皮素为标准品。 以槲皮素的微克数表示总黄酮含量: 吸光度=0.0066 μg槲皮素－0.0357。实验组*3： 体积 CH3COOK DW 95%乙醇 AlCl3·6H2OMEOH层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml H层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml CH层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml EA层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml BUOH层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml W层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml对照组*3： DW CH3COOK DW 95%乙醇 DW体积 0.5ml 0.1ml 2.8ml 1.5ml 0.1ml空白组*3： 体积 CH3COOK DW 95%乙醇 DWMEOH层 0.5ml 0.1ml 2.8 ml 1.5ml 0.1ml H层