浙江医药高等专科学校校内科研项目科技查新报告.docVIP

报告编号： 浙江医药高等专科学校校内科研项目 科 技 查 新 报 告 项目名称： 聚阳离子脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸基因治疗的研究 委 托 人： 委托日期： 查新部门（盖章）： 查新完成日期： 浙江医药高等专科学校科研处 二○○五年制 查新项目名称 聚阳离子脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸基因治疗的研究 查新项目的科学技术要点 随着人类基因组计划的完成，人们对疾病的遗传学物质基础有了更深的了解，基因治疗（gene therapy）成为了一种很有前途的治疗手段，被认为是治疗遗传性先天疾病、恶性肿瘤、传染病等最有希望的治疗方案之一。基因治疗必须要有一个能将目的基因导入机体细胞的载体系统，目前日常用于基因传染载体主要有病毒载体和非病毒载体，以阳离子脂质体和阳离子聚合物介导的基因转染是目前非病毒类载体应用最广泛的两大载体，两者各有优缺点，如阳离子脂质体具有生物可降解性，对细胞的毒性相对比较小，但其不稳定性以及转染效率相对的低，在有血清存在或在体内的条件下，由于某些调理素的影响，其基因的转染效率更低；而阳离子聚合物的材料往往为生物不相容性（特别是在聚合度较高，分子量较大的聚合物材料），对细胞的毒性相对比较大，但其基因的转染效率高，在有血清存在或在体内的条件下，不影响其转染效率。组合以上两种载体的优缺点形成了一种新的非病毒类基因转染载体——聚阳离子脂质体。 端粒酶（telomerase）是一种特殊逆转录酶，由RNA和蛋白质两部分组成的核糖核蛋白，能以自身的RNA为模板逆转录出端粒重复序列，维持染色体末端稳定,使细胞获得无限增殖的能力。现研究认为端粒酶活性增加与恶性肿瘤发生、发展密切相关，正常的细胞（除生殖细胞和造血细胞）无端粒酶活性，它是目前已知最具有特异性和普遍性的恶性肿瘤标志物 。端粒酶具有抗凋亡作用，抑制端粒酶活性可明显抑制肿瘤细胞的生长，并可诱导细胞凋亡 。因此，应用端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性使肿瘤细胞内端粒丢失，进而促进肿瘤细胞凋亡来治疗肿瘤是一种非常诱人的基因治疗新靶点。 本课题研究开发内容： 以DC-胆固醇、卵磷脂及不同分子量的聚醚酰亚胺（PEI），用冷冻-熔融法、逆向蒸发法制备聚阳离子脂质体（polycation liposomes ，PCL）。 不同分子量、不同制备方法的聚阳离子脂质体（PCL）的质量指标研究。其中包括：PCL的形态、粒径大小、Ztea电位、载药量、体外释放，考察制备工艺对PCL的质量影响。 以COS-1为细胞模型，考察PCL的细胞毒性以及PCL介导绿荧光蛋白（GFP）报告基因的转染效率。 以Hela、T24、B16细胞为肿瘤细胞模型，考察PCL介导的端粒酶反义寡核苷酸对肿瘤细胞的作用，其中检测细胞内的端粒酶及P53蛋白的表达量。用流式细胞仪（FCM）检测肿瘤细胞的增殖指数（PI）和S期细胞比率（SPF）。 以B16荷瘤大鼠为动物肿瘤模型，研究PCL介导的端粒酶反义寡核苷酸抗肿瘤治疗。 查新要求 在体内、外，以聚阳离子脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸为肿瘤治疗的研究； 以DC-胆固醇、卵磷脂及不同分子量的聚醚酰亚胺（PEI），用冷冻-熔融法、逆向蒸发制备聚阳离子脂质体。 查具有上述特点的基因治疗研究在国内有无相同或类似的文献报道。 三、文献检索范围及检索策略 检索式： 计算机国内数据库和联网检索： 四、检索结果 采用上述分类号和检索策略，在上述范围检索，查得相关文献 篇。详见附件清单（摘录文献数≤50篇）。 声明： 1、查新项目的科学技术要点和查新要求由委托人填报。 2、本次查新不定结论，仅供报项、立项初步参考。 查新员（签字）： 年 月 日 委托人对查新所获文献的综述评论 经采用上述分类号和检索策略，在上述范围检索，查得相关文献三十余篇。所得文献介绍了脂质体介导的端粒酶反义