细菌内重组法高效制备人Fas基因重组体腺病毒.pdfVIP

讨论 V．Beam595波长激光治疗机是目前国际上治疗血管性疾病的最先进的激光机。595nm是血 红蛋白吸收峰值的最佳波长，当大量的血红蛋白吸收激光热能后受到破坏，形成血栓，造成弥 漫性血管阻塞，是血管闭塞，很难再通，从而达到治疗血管性疾病的目的。同时血管内皮细胞 也受到破坏，使血管闭塞而不再通。该机设有多种脉宽与能量梯度，可以根据不同的病变需要 进行选择。脉宽的不同，在治疗时对粗细血管有一定的选择性作用。大脉宽选择性作用于直径 较大的血管，小脉宽则作用于直径较小的血管，但这也不是绝对的。在加大能量的情况下，其 对血管的选择性作用则变宽。我们的实验数据也支持这个观点。40ms(第l组)是本机的最大 脉宽，从术后第1天的结果可以看出，．大、中血管形成血栓的数量较多，但小血管也有一定数 量的血栓形成。同样，第2、3组以中等血管血栓为主。第4组以小血管血栓为主，但也有其他 管径的血栓形成。 脉宽是治疗时首先要选择的。决定脉宽后选择能量。能量越大，治疗效果越显著，但对组 织的损伤程度也越大，它没有针对性。在能量一定的情况下，对于大脉宽来说相对能量要高于 小脉宽a从试验中我们可以看到，虽然第l、2、3组的能量均为13j，但术后组织的损伤程度第 1组最轻，第2、3组则较重。本实验中我们所选用的能量均高于临床治疗剂量，短期内组织间 隙水肿较重，大量中性粒细胞浸润，晚期纤维组织增生显著。在临床治疗上，要尽量避免这种 超大能量的应用，以免造成纤维组织过度增生。 V-Beam激光机对血管性病变的治疗效果是可以肯定的。与对照组相比较，普遍存在一个 轻度减少的趋势。对血管性疾病的治疗，治疗次数是非常主要的，在实验中术后第l天，血栓 形成较多，开放的血管数量变少，但是到了第7天和第2】天，有一些组的血管增多。以第l组为 例，到第2l天时，血管数量已基本恢复到术前水平，而且此时组织也已基本恢复正常，是较为 合适的第2次治疗时限。 通过实验我们发现治疗后短期内血管数量下降明显，但随着时间推移，血管数量又有明显 回升。究其原因可能有以下3点：(I)平时有很多血管处于闭塞、不用状态，当血管数量减少、 应及时血管开放，导致血管数量增加。(2)血管在大量受到损害、形成血栓时，由于机体的需要 在各种因子的作用下血管再生。(3)某些损害较轻的血管可以再通。 血管性疾病需要多次进行治疗．在适当脉宽的基础上选择适当的(不要过大)能量将不会 导致皮肤的损害，同时可以通过严格控制治疗周期，来缩短疗程。 细菌内重组法高效制备人FaS基因的重组体腺病毒 鲁峰高建华 第一军医大学南方医院整形外科(510515) 摘要背景Fas单克隆抗体(19M型)可以诱导正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞凋亡 而不能诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡。信号传导通道及PCR-SSCP的研究又发现F∞蛋白死亡 域基因发生了突变。目的：采用细菌内重组法高效制各人Fss基因的重组腺病毒，感染瘢痕疙 7l 瘩成纤维细胞后，使其稳定高效地表达以替换原有无功能的F罄蛋白。为后续瘢痕的基因治疗 提供实验基础。方法：F鹊基因自PM阻T-F笛质粒中切取，应用高效细菌内同源重组系统构建 携带F笛基因的重组腺病毒，感染瘢痕疙瘩成纤维细胞，检测F雏蛋白的表达。结果：成功构 建了携带F笛基因的重组腺病毒，并在其感染瘢痕疙瘩成纤维细胞后检测到稳定高效表达的 F篮蛋白。结论：细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。 抽剖备的Ad．F∞在体外能有效表达相应的基因产物，为今后的深入研究奠定了基础。 瘢痕疙瘩(keloid)是整形外科领域的重点和难点之一。瘢痕疙瘩有手术与非手术治疗两 种治疗方案，但无论哪种方案效果都不甚理想。其过度增殖的能力和致残或损形的程度，以及 难以控制的术后再发，长期困扰着整形外科医生。因此研究keloid的发病机理和根据此机理相 对应的治疗是整形外科界的热点之一。 现已证明成纤维细胞在瘢痕的形成中有着举足轻重的作用，是瘢痕疙瘩形成的功能性细 胞。正常情况下，成纤维细胞是通过细胞凋亡维持自身群体数目的平衡但众多的研究均证明瘢 痕疙瘩成纤维细胞存在异常的凋亡，从而导致成纤维细胞的增殖一凋亡失衡，这就是导致瘢痕 疙瘩不断增生而且难以退化的细胞学基础。 随着免疫学和细胞生物学的发展，Fas／F鹊L系统在调控细胞增