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实验13 生物化学鉴定 返回目录 ??一、糖发酵试验 【原理】 各种细菌所含有的分解糖（苷、醇）的酶类不同，对糖（苷、醇）的分解能力各有差异。对某一种糖有的细菌不分解，有的分解后仅产酸，有的分解后既产酸又产气，据此可用以鉴别细菌。 【试剂与器材】 1.菌种?大肠埃希菌、伤寒沙门菌 2.培养基?葡萄糖和乳糖发酵管 【操作步骤】 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖发酵管内，35培养18h～24h观察结果。 【结果】 观察结果时，首先确定细菌是否生长，若细菌生长则培养基混浊，然后再观察细菌对糖类分解的结果： 不分解糖：培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以“一”表示； 分解糖只产酸不产气：培养基中的指示剂（溴甲酚紫）由紫色变为黄色，液体培养基中的倒管未发现气泡；若为半固体培养基，则培养基内未见气泡或琼脂断裂，记录时以“+”表示； 分解糖既产酸又产气：除培养基中的指示剂颜色改变外，液体培养基中的倒管见有气泡；若为半固体培养基，则培养基内出现气泡或琼脂断裂，记录时以“”表示。 本试验大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产酸又产气“”，伤寒沙门菌分解葡萄糖只产酸不产气“+”，不分解乳糖“-”。 【注意事项】 配制糖发酵管时内装的小倒管在接种细菌前应是无气泡存在的，否则不宜接种细菌。 【思考题】 糖发酵试验的原理及其结果判断。 二、甲基红试验 【原理】 甲基红是一种指示剂，PH在4.5以下时显示红色，PH在6.2以上是为黄色。某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，使培养基的PH降至4.5以下，此时，加入甲基红指示剂后培养基呈红色（阳性）。另一些细菌分解葡萄糖产生的酸可以进一步转化为醇、酮等非酸性物质，使培养基的PH在6.2以上，加入甲基红试剂后呈黄色（阴性）。 【试剂与器材】 1.菌种?大肠埃希菌、产气肠杆菌 2.培养基?葡萄糖蛋白胨水 3.试剂?甲基红试剂 【操作步骤】 1. 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，35培养24h，观察结果。 2.结果：在培养物中加入甲基红指示剂2滴～3滴，立即观察，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。本试验大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。 【思考题】 甲基红试验的原理及其结果判断。 三、V-P（Voges-Proskauer）试验 【原理】 某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸可进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下被氧化成为二乙酰，后者与蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的胍缩二乙酰而呈现红色，为VP试验阳性。若培养基中胍基含量少，可加入少量含胍基的化合物如肌酸肌酐等（本试验加入α萘酚）可以加速其反应。 【试剂与器材】 1.菌种?大肠埃希菌、产气肠杆菌 2.培养基?葡萄糖蛋白胨水 3.试剂?VP试验甲液（6%α萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液） 【操作步骤】 Barritt法：将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，35培养24h～48 h，于培养物中加入VP试验甲液（6%α萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液）各1滴，充分摇动试管，观察结果。 结果：如立即或于数分钟内出现红色反应者为阳性；若不出现红色反应，可将试管置35孵育4h后再行观察，仍无红色出现者为阴性。本试验大肠埃菌为阴性、产气肠杆菌为阳性。 【注意事项】 滴加VP试剂甲液和乙液后需摇匀，静置10min后才能看到红色化合物出现。 【思考题】 V-P（Voges-Proskauer）试验的原理及其结果判断。 四、吲哚（indol）试验（又称靛基质试验） 【原理】 有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。吲哚本身无色，不能直接观察结果，但可与吲哚试剂中的对位二甲氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚，而呈现红色被肉眼识别。 【试剂与器材】 1.菌种?大肠埃希菌、伤寒沙门菌 2.培养基?蛋白胨水 3.试剂?吲哚（靛基质）试剂 【操作步骤】 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水培养基中，35培养18h～24h。 结果：沿培养管壁缓缓加入吲哚试剂数滴，静置半分钟，使成界面清楚的两层溶液，仔细观察培养液与吲哚试剂交界处，出现玫瑰红色者为吲哚试验阳性，不变色者为阴性。本试验大肠杆菌为阳性，伤寒沙门菌为阴性。 【思考题】 吲哚试验的原理及其结果判断。 五、明胶液化试验 【原理】 某些细菌具有明胶酶，能分解明胶为多肽，多肽进一步分解为氨基酸，使明胶失去凝固力。 【试剂与器材】 1.菌种?大肠埃希菌、普通变形杆菌 2.培养基?明胶培养基 【操作步骤】 将普通变形杆菌和大肠埃希菌分别穿剌接种于明胶培养基中，置22培养5天～7天，逐