实验十植物染色体标本的制备和观察.pptVIP

实验十 植物染色体标本的制备和观察 一 实验目的 掌握常规压片法和去壁低渗法制备 植物染色体标本的基本原理和方法。 二 实验原理 常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染色体容易变形和断裂。 去壁低渗法是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉，使植物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。 三 实验仪器、材料和试剂 1 仪器、用具：培养箱、显微镜等 2 材料：蚕豆种子 3 试剂： ⑴ 秋水仙素 ⑵ 磷酸缓冲液 ⑶ 甲醇、冰醋酸 ⑷ 改良苯酚品红染色液 ⑸ 混合酶液 三 实验仪器、材料和试剂 3 试剂： ⑹ 70%、85%、95%乙醇 ⑺ 1mol/L HCL 四 实验方法（压片法制备染色体标本 ） 1 取材 把蚕豆种子预先浸泡6小时，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃温箱中发芽，幼根长至1～2cm左右，于上午13～14时剪下根尖0.5cm。 2 预处理 将剪下的根尖置0.02%秋水仙素溶液中，浸泡处理4小时。 3 固定 用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋酸（3∶1）固定6～24小时，再经95%、85%酒精各半小时，最后转入70%酒精中，4℃保存备用。 四 实验方法（压片法制备染色体标本 ） 4 解离 取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl中60℃解离 8～10min，再用蒸馏水洗净。 5 染色 改良苯酚品红染色液染色5～10min 。 6 压片 把根尖放在载玻片上，切取分生区部分，加一滴染液，用镊子捣碎，盖上盖玻片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 7 镜检。 四 实验方法（去壁法制备染色体标本 ） 1．取材 将蚕豆种子放在25℃温箱中发芽，待根长到1～2cm时使用。 2．前处理 根尖用0.1%秋水仙素溶液处理3～4小时。 3．固定 用水洗净处理过的根尖，经甲醇/冰醋酸（3∶1）固定2-24小时，换入70%酒精保存。 四 实验方法（去壁法制备染色体标本 ） 4．水解 取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl中60℃解离 14～15min，再用蒸馏水洗净 5 染色 改良苯酚品红染色液染色5-10min。 6 漂洗 漂洗液换洗2-3次，每次1-2min。 7 酶解 切取着色深的分生区放到小杯中，加入混合酶液（2.5%纤维素酶+2.5%果胶酶），25℃下酶解2～4小时。 四 实验方法（去壁低渗法制备染色体标本 ） 8． 洗涤 倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后加入45%醋酸。 9 压片 吸取材料，置于载玻片， 盖上盖玻片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 10 镜检 五 作业 绘出植物中期细胞染色体图。 五 注意事项 前处理的浓度和时间以及酶解的时间直接影响染色体标本制备的质量。 * *