盐酸小檗碱对人胃癌细胞凋亡和P53、bcl-2基因表达水平的影响.pdfVIP

图5各组别胃癌细胞VEGF的表达比较 3讨论 目前，COX．2促肿瘤发生发展的机制已有较多阐述，但其与胃癌诸多病理因素间关系的报道尚 不一致。有实验结果显示，COX．2在正常胃黏膜、浅表性胃炎、萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生及 胃癌组织中的表达呈逐渐递增趋势，阳性率依次为6．67％，17．86％，30．43％，42．11％和62．26％。提 示COX．2在促胃癌发生发展的过程中遵循Correa等提出的肠型胃癌的发生模式：正常胃黏膜一慢性 浅表性胃炎一慢性萎缩性胃炎一肠上皮化生一不典型增生一胃癌的顺序演变过程，即COX．2参与了 胃癌形成的全过程，可能为其早期事件。COX．2高表达与胃癌组织学分级、浸润深度及有无淋巴结 转移有关。在高中分化胃癌组中的表达显著高于低分化组，在侵及浆膜组与有淋巴结转移组中的表 达亦高于未侵及浆膜组与无淋巴结转移组。提示COX．2不仅参与了胃癌形成的早期过程，且与胃癌 的侵袭、转移及预后亦有一定的关系。以往的研究表明在胃癌细胞中COX．1的表达呈阳性，与本试 验结果相一致。 从RT．PCR的结果来看，莪术对COX一2mRNA和COX．1mRNA均有明显的抑制作用，从对COX 的选择性来看，莪术对COX．1和COX．2的抑制无明显差别。 从Western blot的结果来看，中西药对COX一2均有明显的抑制作用，而对COX．1则无抑制作用。 其中，在抑制率相同的情况下，莪术对COX．2的抑制作用要强于celecoxib。 抑制VEGF表达，从而抑制肿瘤血管的新生，抑制肿瘤的增殖和发展。 综上所述，中药莪术抗肿瘤的机理可能是通过抑制COX．2表达，使VEGF表达下调，或直接抑 制VEGF表达，从而抑制肿瘤血管的新生，达到抗肿瘤作用的。 盐酸小檗碱对人胃癌细胞凋亡与 P53、bcl．2基因表达水平的影响 1．山东中医药大学附属医院济南市文化西路42号(250011) 2．山东中医药大学济南市经十路53号(250014) 姚保泰1吴敏2王博2 小檗碱是传统中药黄连的有效成分，具有抗炎、抗肿瘤、提高免疫力等功能。近年来有关小檗 一127— 碱抗肿瘤的研究较多…，但对其诱导胃癌细胞凋亡及调控基因表达的研究较少。本研究对小檗碱诱 导人胃癌细胞凋亡与P53、bcl．2基因mRNA及蛋白表达进行了深入的探讨。 1材料与方法 1、l 细胞培养及药物干预 置于37C，5％C02孵育箱(Forma 组，大、小剂量及对照组均做5个复孔，继续培养72小时，收集细胞送检。 1．2流式细胞仪检测(FAC) 收集经过不同浓度药物处理的胃癌细胞1×106，PBS洗涤后，于旋涡混匀状态，滴入95％乙醇， 亡率，分析细胞周期。 1．3 末端DNA标记法(TuNEL)检测AI 收集经过不同浓度药物处理的胃癌细胞，PBS洗2次后用10％甲醛固定，40C过夜。脱水、透明、 石蜡包埋，细胞切片(厚度3～5um)，将细胞切片贴在事先涂有一簿层左旋多聚赖氨酸的载玻片上， 室温下自然干燥。脱蜡、水化后用蛋白酶K消化，PBS洗2次，用0．3％H202去除内源性过氧化物 胺)显色，镜下观察至显色后终止反应，蒸馏水冲洗。用甲基绿复染，正丁醇脱水，二甲苯透明， 中性树胶封片，镜下观察、计数。光镜下计算凋亡指数(ApotosisIndex，AI)：随机计数5个高倍视 野的肿瘤细胞共500个，计算每100个细胞中阳性细胞数，即为凋亡指数。 1．4琼脂糖凝胶电泳 胞裂解液(1％NP．40，20mmol／IEDTA，50mmol／ITris—HClos后于1600转／分离心5 pH7．5)100n1，1 NaAC 然后加入蛋白酶K(PK)(终浓度2．5pg／m1)，于56℃消化2小时，加入1／10体积的3MpH5．2， 2倍体积的无水乙醇，．20。C lh，离心，沉淀加入上样液20Ⅲ溶解