消痞灵冲剂对萎缩性胃炎伴不典型增生大鼠胃粘膜DNA含量与细胞增殖活性的影响.pdfVIP

北京中医药学会2005年年会论文汇编 消痞灵冲剂对萎缩性胃炎伴不典型增生大鼠胃 粘膜DNA含量和细胞增殖活性的影响 北京中医药大学东直门医院(100700) 杨晋翔 鲁香凤 张旭晨戴欣 卜益民指导：田德禄赵凤志 研究发现，慢性萎缩性胃炎伴发不典型增生时癌变率较高，经临床实践表明，中医中药治 疗已取得了较为满意的效果。本研究在建立萎缩性胃炎伴不典型增生的动物病理模型成功的 基础上，已观察了中药消痞灵冲剂对萎缩性胃炎伴不典型增生大鼠胃粘膜组织形态、生化、 CEA及rasp21等方面指标的影响，本研究则着重观察萎缩性胃炎伴不典型增生大鼠胃粘膜 DNA含量、AgNOR及中药消痞灵冲剂的抑制作用，从细胞增殖角度进一步探讨萎缩性胃炎伴 不典型增生发生机理及中药防治有效机制，为临床用药提供一定的实验依据。 l材料与方法 心提供，随机将大鼠分为两大组： 1．1．1 嚣：=防实验组①正常对照组(15只)；②病理模型组(30只)：③消痞灵冲剂预防 组(20只)。 冲剂治疗组(20只)；④阳性对照药维酶素治疗组(23只)。 1．2模型制备方法大鼠禁食不禁水24h后，以10％水合氯醛腹腔麻醉，在无菌条件下 开腹，在腺胃距胃幽门环0．2cm处切一小门，将一长约2cm的金属弹簧一端插入幽门环，并用 缝线将弹簧两端固定，按手术常规逐层缝合胃及腹壁切口。手术1W后，每周给每只大鼠分别 灌胃2次10％氯化钠液和60—70。C热糊，每次2ml，至实验第4个月结束。 1．3药物及给药方法消痞灵冲剂主要由党参、炙百合、香橼皮、丹参、三七粉、莪术、蒲 公英、白花蛇舌草等9位药物组成，由北京中医药大学东直门医院制剂室制成冲剂。阳性对照 药维酶素由北京长城制药厂生产，其主要成分为多种维生素、氨基酸及微量元素。预防组大鼠 自然恢复组大鼠于造模4个月后，常规喂养2个月。消痞灵冲剂治疗组于造模4个月后给药， 给药方法和剂量同预防组，共给药2个月，至实验6个月时结束。维酶素治疗组大鼠于造模4 个月后，每日每只灌胃维酶素混悬液2ml，每ml含药量0．29，共2个月，至实验6个月时结束。 1．4流式细胞仪检测所需样品的制备： 1．4．1单细胞悬液样品的制备 每例石蜡包埋组织块切取40urn厚的组织片5—8片放人试管内，二甲苯脱蜡，梯度酒精 ·48· 北京中医药学会2005年年会论文汇编 1．4．2DNA染色 将单细胞悬液调整到细胞数为1×105／ml左右，加溴化乙啶染液lml。染液中含溴化乙啶 lOug／ml；RNA酶10mg／ml，Triton—x一1001．O％。置4℃冰箱染色30分钟，500目筛网过滤后 上机测试。 1．4．3流式细胞仪检测 出功率300roW的氟离子激光作发射光源。为保证每次试验条件的稳定性，在试验前以鸡红血 球作为校准机器的标准样品，使变异系数值5％。每例标本测10，000个细胞，测量结果在 行数据处理。 1．4．4DNA指数及增殖指数计算 以DNA指数(DNA ÷正常胃粘膜上皮细胞Go／G1峰均道值。根据仪器的CV值及正常胃粘膜组织细胞的D1分 量。细胞周期分析：根据细胞DNA含量分布组方图，由程序化的计算机采用Badooe的图解 1．5 Ploton改良法显示胃粘膜ARNOR 1．5．1染色方法 Ploton改良法染色步骤为①组织切片常规脱蜡，梯度酒精水化。②双蒸水洗。③AgNOR 染液配制：将明胶溶于l％甲酸液，配成2％甲酸明胶液。然后将此液按l：2体积比与50％硝 酸银混合即为工作液。④滴加染液于组织切片上，室温下避光染色60分钟。⑤充分水洗后， 逐级酒精脱水、透明、中性树胶封固。 1．5．2AgNOR计量方法 析仪进行检测。测定指标为细胞核内AgNOR颗粒数、颗粒总面积以及颗粒总面积与细胞核总 面积之比。每张切片随机测量100—l10个细胞，最后取其平均值。数据处理用t检验方法。 2结果 2．1 消痞灵冲剂对大鼠萎缩性胃炎伴不典型增生的预防作用 2．1．1消痞灵冲剂对细胞DI的影响； 造模4个月时，模型组大鼠大部分出现胃粘膜不典型增生之病理改变，此时，反映细胞 之DI值无明显升高，基本接近正常组。见表l。