云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究.pdfVIP

· 6 · 《上海 畜牧兽 医通讯 》 2012年第 5期 云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究 毕保 良 。 李富祥 胡 骑 宋建领 李华春H (1云南省畜牧兽医科学院 云南 昆明 650224 2云南农业大学动物科学技术学 院 云南 昆明 650201) 【摘要】从云南省 3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到 7株革兰氏阴性小杆菌，用生理生化鉴定、药敏试验 和致病性试验对分离菌株进行鉴定 ，并提取细菌的质粒，分析质粒与细菌耐药性之 间的相关性 。结果表明：7株分离株 经生理生化试验鉴定为仔猪黄 白痢大肠杆菌 ，对小白鼠有强致病性 ，分离株对 15种抗生素表现为 多重耐药，其 中14耐 1株 、l3耐 2株、11耐2株、8和 8耐以下2株，头孢类抗生素是治疗仔猪黄 白痢的首选药物 ，表明云南猪大肠杆茵 已经 呈现 出十分严重的耐药性。质粒 图谱分析表明，4株分离株均携带分子量约为 5000bp的一个质粒 ，而另外 3株不携 带任何质粒 。质粒转化实验表明，分离株所携带的质粒为非耐药性质粒，与细菌耐药性无直接相关性 。 关键词 ：仔猪黄 白痢 ；多重耐药大肠杆 茵；分 离；鉴定 ；质粒 仔猪黄 白痢是由致病性大肠杆菌 引起仔猪 的一种急性 用 15种常用抗生素对分离株进行药物敏感试验。方法 肠道细菌性传染病 ，仔猪黄痢 以排黄色或黄 白色稀粪为特 如下 ：将本菌纯培养物用灭菌生理盐水稀释至 10CFU／ml后 征 ，多发于 出生后 l～3d的仔猪 ；仔猪 白痢主要 以排乳 白色 涂布于营养琼脂 ，按美 国临床试验标准研究所 CLSI／NCCLS 或灰白色浆糊状腥臭粪便为特征 ，主要发生于 1O～30 日龄 1999~2005年颁布的药敏实验标准和规定进行实验和判定结 的仔猪 ，两者常常伴随发生 。如果不及时治疗 ，仔猪黄 白痢 果 。判定标准为抑菌 圈直径 在 15～20ITIITI为高敏 ，1O～ 很容易导致仔猪死亡 ，给猪场和养殖户带来 巨大的经济损 14mm为中敏 ，10mm 以下为低敏 ，0mm 为不敏感 (耐药)。 失 。近年来 ，随着兽医临床治疗用抗生素的不合理应用 以及 1．8 小 白鼠致病性 实验 一 些低剂量预防性用药 ，尤其是饲料 中各种抗生素 的添加 ， 将 7株分离株纯培养物分别稀释于灭菌生理盐水制成 在各种抗生素 巨大 的选择压力下 ，耐药性大肠杆菌急剧增 菌液 ，用细菌平板记数法测定菌液的浓度为 8×1O～1．3× 加 ，给大肠杆菌 的治疗带来 了严重 的困难 ，同时也给人类食 10CFU／ml，腹腔注射 4只小 白鼠，0．2ml／只，并设 肉汤作 品安全留下安全 隐患。。本研究对云南省 3个不 同地 区规 空 白对照 ，记录发病和致死情况 ，观察 7株分离株对小 白鼠 模化猪场仔猪黄白痢病死猪体 内大肠杆菌进行分离鉴定 ，分 的致病性 ，剖解病死小 白鼠，无菌采肺脏 、肝脏做细菌分离培 析其耐药性 ，并初步研究其耐药性与菌株携带质粒之间的相 养 ，同时观察病理变化 。 关性 ，为仔猪黄 自痢大肠杆菌 的治疗提供科学依据 ，同时也 1．9 细菌质粒 图谱分析 为大肠杆菌防控提供分子理论依据 ，具有重要 的理论价值和 按细菌质粒提取试剂盒操作说 明提取细菌质 粒 ，用 实践 意义。 1．2 琼脂糖凝胶 电泳 ，并用琼脂糖凝胶成像分析系统照相 ， 1 材料与方法 获得细菌质粒图谱 ，分析 7株分离株质粒 图谱 的相关性 。 1．1 病料 来 源 1．10 质粒转化实验与细菌耐药性之 间的关系 来 自云南省 3个不 同地 区规模化养猪场黄 白痢仔猪 的 按照质粒转化实验方法 ，将 4个质粒分别转化至 DH5a 肺脏 、肝脏和肠 。