血管神经化组织工程骨构建.pdfVIP

蔓!!墨兰里墨壁竺整兰垄墨鎏矍星堕圣壁垒銎塑塑塞 血管神经化组织工程骨的构建 陈滨裴圄献汪群立曾宪力壬永刚王学明金丹魏宽海王珂张元平刘勇 南方医科大学南方医院刨伤骨科 临床上经常遇到各种难以处理的骨缺损的病例，尤以大段的负重骨的骨缺损更为棘手。骨组织工程技 术的出现给这一难题的解决带来了希望。到目前为止，材料，细胞复合物已能在肌肉．皮下等异位组织内成 骨，或是在小型哺乳动物的骨缺损处修复成骨。但这与临床的实际仍有较大的差距。为此要探讨骨组织工 程技术能否修复大型哺乳动物大范墨的骨缺摄。骨组织的发生和骨拆愈合过程表明， 良好的血供对骨组 织的形成和骨折的愈合是非常必要的，组织工程从根木上来说是一个仿生的过程，所以在体外构建的组 织工程化骨中建立一套血管网是很必要的。目前国内外对组织工程化骨血管化的研究主要集中在材料、种 子细胞、细胞因子和利用显微外科技术将带血供筋膜瓣包裹材料、血管柬植入等方面，而对组织工程化 骨神经化的研究相对滞后。神经系统在对机唪其他系统的发生、发育、再生和功能发挥上起着重要的控制 和调节作用。同样对于骨的生长、修复、改建过程中也不可缺少。现已表明骨组织中的神经纤维主要为肽 能神经，主要的神经肽有降钙素基因辐关肽(cGRP)、神经歇Y(N tP)。 PY)、P物质(sP)、血管活性肠肽(v 其中含SP、CGRP的肽能神经来源于感觉神经，含VIP，N PY的肽能神经来源于自主神经。因此组织 工程化骨的血管神经化是不可分割的，采用血管、神经柬植入的方法构建血管神经化组织工程骨的模型， 最大限度的模拟体内成骨过程，对于成骨机制及因素等的研究具有重要临床意义。 一、血管化组织工程骨修复山羊胫骨骨缺损 (一)方法 1．分组：实验用缝康中国青山羊36只(由原第一军医大学实验动物中心提供)，12月龄．体重 MarrowStromacell Hydroxyapatite，CHAP)、B组(CHAP+经诱导分化的骨髓基质细胞BoneBMSc． 2．细胞培养：组织工程骨组和筋膜瓣组用中国青山羊双侧髂骨处备皮后穿刺抽取红骨髓10ml，混入 逐日观察。待细胞汇合成单层后以0．25％胰蛋白酶消化，记数，用DMEM条件培养基(含10％胎牛血清， 材料。 3．动物损模型的制备：左侧后肢前外侧弧形切开。于胫骨外侧放置已塑形好的AO七孔窄动力加压钢 板，除第四孔外，其余孔螺丝钉圈定，不拧紧。环行剥离胫骨中段骨膜，于钢板第三、五孔之问．即距离 胫骨结节5cm，7cm处线锯锯断胫骨。切除该段对应的骨膜。拧紧加压螺钉，造成2cm的段缺性骨与骨膜 156 中青年优秀论文评选 缺损。A组骨缺损模型同上．先固定钢板，在深筋膜的浅、深层锐性分离，注意保护真皮血管网，解剖出 有较大血管蒂和完整血管网的深筋膜，观察血管蒂和血管网走行．保护主要血管蒂，修剪成吖lmm×30ram 大小，将植入物纵行包裹一周，丝线缝合，露出植入物两端，嵌入骨缺损。 4．观测指标：增加A组6只进行长期观察，时间点设为6月、12月、18月、24月．进行X线检查， 及组织学检查、12周生物力学检查评价各组成骨及再血管化情况。为了观察长期结果。额外增加A组6 只在术后6、12、18、24月行x线及组织学检查，评价骨缺损修复情况及珊瑚羟基磷灰石的体内转归。 (二)结果 1．大体观察：术后D组在各个时间点均无骨组织形成，至术后12周骨缺损仅由一层菲薄的结缔组织 连接。c组4周时，材料与两骨折端无明显连接，可轻易拿出。8-12周时，仅在两端形成一定的骨性连接． 有少量骨样组织生成．但不牢固，材料表面未见明显骨质形成和骨痂形成。羟基磷灰石的腔隙可见。B组 骨4周时可形成材料与骨断端的骨连接，CHAP表面有骨样组织生成．8-12周骨缺损渐被充填，材料表面 可见有较多骨痂突出并向中央集中，并基本包裹材料，原CHAP表面的腔隙已被充填。A组骨