抗STAT5抗体的制备和其在人乳腺癌发生、发展中的作用机理的初步研究.pdfVIP

节翰★■’： -_蛳， 交流论文 萋；褫豫■_’萋黧乏：：： 2、体内抗肿瘤活性研究表明R16能明显抑制小鼠S一180肉瘤和H：：肝癌的生长，活性强于 amonafide和R7、R9。 呈现明显的量效关系。 4、R16能剂量依赖性地诱导HL一60细胞凋亡，作用强于amonafide。 抗凋亡因子，上调tBid等促凋亡因子，促进线粒体里的细胞色素c和AIF释放到细胞质中，其效应比相 途径。 的TopolI的去连环活性，且比VPl6的抑制作用强；TardisAssay显示R16呈剂量依赖性地捕获TopoII— 小时就能导致HL60 平，结果和单细胞凝胶电泳的一致。 于TopoII。引发下游生物学效应，如凋亡等。 结论：萘酰亚胺类衍生物R16具有明显的体内外抗肿瘤活性，作用强于amonafide。对其抗肿瘤机 效应(凋亡)；J|．R16捕获TopoII可切割复合物的能力优：J=amonafide。 II抑制剂；DNA损伤；周期阻滞；细胞凋亡 关键词：R16；抗肿瘤作用；Topo 抗STAT5抗体的制备及其在人乳腺癌发生、 发展中的作用机理的初步研究 陈晶’单保恩2 1．白求恩国际和平医院2．河北医科大学第四医院科研中心 【摘要】 制备抗STAT5抗体，分别应用免疫组化法和免疫印迹法检测不同个体正常乳腺组织和乳腺癌组织中 其机理。 ■263、 ■ ● ●● 第九届全国肿瘤药理和化疗学术会议论文集 ’黟，， ．● 囊麓 露+，。∥ 方法：将STAT5基因转染Sf21细胞，培养48h，用超声波降解器和蛋白提取液裂解细胞并提取细 迹实验鉴定。应用重组小鼠STAT5蛋白，常规免疫雄性家兔，制备兔抗STAT5血清，经饱和硫酸铵盐 析、膜透析和DEAE一52层析柱分离、纯化兔抗STAT5多克隆抗体，并用免疫印迹法检测抗体的纯度和 特异性。随机选取乳腺癌手术患者标本52例，以20例良性乳腺组织标本作为对照，采用免疫组化S— P法用所制备的抗STAT5多克隆抗体检测STAT5在乳腺组织中的定位情况，比较其差异性。随机选取 女性乳腺癌患者44名，病变标本离体半小时内取癌组织及距其5era正常乳腺组织标本各两份，用免 癌细胞株MCF一7和MDA—MB一231增殖反应的抑制作用；应用流式细胞技术测定和观察了72hJAK抑制 剂I在上述四个浓度中诱导MCF一7和MDA—MB一231的细胞周期及细胞凋亡的作用与效果，并用免疫 印迹法观察MCF一7细胞在24h、48h和72h对STAT5和Bel—xl蛋白表达的影响。 结果： 200凝胶层析纯化后，得到一个4．86 分离，得到STAT5蛋白，分子量均为94KDa。迸一步用Superdex 论分子量吻合。 子量理论值相符。用抗STAT5血清做免疫印迹证实，于94，000处有一明显的条带，证明是抗STAT5特 异性抗体。 3．乳腺组织切片经抗STAT5抗体免疫组化染色，STAT5蛋白阳性反应为黄到棕黄色细小颗粒，定 位于细胞核。按照阳性细胞数量分级：STAT5阳性细胞数少于观察细胞数的5％为阴性；阳性细胞数 5％为阳性，其中阳性细胞数占5％一24％为+，阳性细胞数占25％一50％为++，阳性细胞数大于 50％为+++。乳腺癌组织中STAT5阳性细胞数多少与乳腺癌的病理组织学分级存在统计学意义上的正 相关关系(r=0．24，P=0．03)。 4．44例乳腺癌组织中STAT5蛋白平均表达水平高于相应正常乳腺组织，P0．05，平均为正常乳 腺组织的1．6l倍。低分化乳腺癌STAT5蛋白的平均表达水平明显高于中分化乳腺癌(t=3．416， 4-1．37和3．31 (STAT5A—aetin)分别为1．82 (STAT5B／一aetin)分别为2．1