外源性硫化氢对肝癌细胞系HepG2自噬的影响.pdfVIP

20l5年 2月 首 都 医 科 大 学 学 报 Feb．2015 第 36卷 第 1期 JournalofCapitalMedicalUniversity Vo1．36 No．1 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2015．01．022] · 基 础 研 究 · 外源性硫化氢对肝癌细胞系HepG2自噬的影响 陈 宁 王珊珊 陈玉涵 殷继明 陈德喜 丁惠国 (1．首都医科大学附属北京佑安医院肝病消化中心，北京 100069；2．北京市肝病研究所，北京 100069) 【摘要】 目的 探讨外源性硫化氢(hydrogensulfide，HS)对肝癌细胞系HepG2细胞自噬的影响及其机制。方法 应用外源性 HS供体——硫氢化钠 (sodiumhydrosuflide，NariS)处理HepG2细胞，采用Westernblotting方法检测 自噬相关蛋白微管相关蛋白轻 链3一Ⅱ(mierotubule-associatedlightchain3-11，LC3-11)表达变化，Real—timePCR方法检测 自噬相关基因beclinl和atg5的mRNA表达 浓度，免疫荧光方法观察 HepG2细胞 自噬颗粒变化、凋亡相关蛋白M30及凋亡小体变化，AnnexinV／PI双标记流式细胞术检测细胞 凋亡情况。结果 瞬时转染绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)一LC3质粒后，发现NaHS处理组HepG2细胞内GFP—LC3Ⅱ 绿色荧光斑点明显增加，M30阳性细胞率 [(8．37±1．03)％]，与对照组 [(2．14±0．69)％]比较差异有统计学意义 (尸0．05)；同 时，高倍镜下观察结果显示，NaHS处理后细胞核异染色质明显增加，凋亡小体形成。AnnexinV—FITC／PI双染结果显示 NaHS处理组 细胞凋亡率高于对照组[(16．32±0．28)％vs(0．67±0．09)％]，差异有统计学意义(P0．05)。Real—timePCR显示NaHS可增加 HepG2细胞beclinl和atg5mRNA表达水平 ，LC3．II表达明显增加。且自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤 (3-methyladenine，3-MA)可 降低NaHS所致的beclinl和ng5的mRNA表达。结论 外源性硫化氢能够上调 自噬相关基因beclinl和atg5表达，进而促进 HepG2细胞发生 自噬，并诱导细胞凋亡。 【关键词】 硫化氢；自噬；自噬蛋白微管相关蛋白轻链3一Ⅱ；凋亡 【中图分类号】 R969．9 EffectsofexogenoushydrogensulfideonautophagyofHepG2cells ChenNing，WangShanshan ，ChenYuhan ，YinJiming，ChenDexi，DingHuiguo (1．DepartmentofGastroenterologyandHepatology，BeijingYou’alzHospital，CapitalMedwdUniversity，Beijing100069，China；2．Bejiing InstituteofHepatology，Beijing100069，China) A【bstract】 ObjectiveToinvestigatetheeffectsofexogenoushydrogensulfide(H2s)ontheautophagyofHepG2cellsanditsunderlying mechanism．Methods HepG2cellswereadministratedbysodiumhydrostdfide(NaHS)，adonorofH2S，for24h，theexpressionofautophagy— relatedproteinLC3-ⅡwasdetectedviaWestern blotting；ThemRNAlevelofautophagyrelatedgenebeclinlnadm weredetectedviaRT—PCR。 Theautophagyparticlesnadapoptosiswereobservedusingirmnunofluore