5-Aza-dC和TSA对肝细胞癌细胞株中3-OST-2甲基化和基因表达的影响.pdfVIP

· 356 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2013Apr；29(4) 5-Aza—dC和 TSA对肝细胞癌细胞株 中3-OST．2甲基化 和基 因表达的影响 姚树哲 ，陈海燕，张晓莹，盛 燕，周庚 寅，张翠娟 摘要：目的 探讨5Aza—dC和TSA对肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma，HCC)细胞 中3-OST-2甲基化水平 、基因表达以及对 核转录因子UHRF1(ubiquitin—likewithPHDandringfingerdomains1，也称为 ICBP90／NP95)表达的影响。方法 采用甲基化 特异性PCR(methylationspecificPCR，MSP)法检测药物作用前后HCC细胞株中3-OST一2甲基化的状态改变；采用实时荧光定 量RT—PCR法检测3-OST一2和UHRF1mRNA的表达变化；采用细胞爬片免疫组化法检测 UHRF1蛋白表达。结果 3-OST一2 在HCC细胞株中呈完全甲基化状态，5-Aza．dC或TSA均能部分逆转3-OST一2甲基化，其 mRNA表达分别增加 2．7倍和4．9 倍，两种药物联合处理后，3-OST-2甲基化被完全逆转 ，其 mRNA表达增加9．1倍。5-Aza—dC或TSA均能降低UHRF1mRNA 和蛋白的表达 ，TSA比5-Aza—dC疗效更好(P0．01)，两种药物联用具有协同作用 (P0．01)。结论 启动子甲基化和组蛋 白修饰共同导致3-OST一2基因表达降低。5-Aza—dC和TSA单独作用均能部分逆转3-OST-2甲基化，增加其mRNA表达，抑制 核蛋白UHRF1表达可能是其中机制之一。 关键词：肝细胞肿瘤；5一Aza—dC；TSA；甲基化；抑癌基因 中图分类号：R735．7 文献标志码：A 文章编号：1001—7399(2013)04—0356—05 Effectsof5-Aza—dC andTSA onmethylationandexpressionof3一oST_2geneinhumanhepa- tocelluarcarcinomacells YAOShu—zhe，CHENHai—yan，ZHANGXiao—ying，SHENGYan，ZHOUGeng—yin，ZHANGCui-juan (DepartmentofPathology，ShandongUniversitySchoolofMedicine，Jinan 250012，China) Abstract：Purpose Toinvestigatetheeffectsof5-Aza—dC andTSA onpromotermethylationandgeneexpressionof3-OST一2aswell astheexpressionofnucleartranscriptionfactorUHRF1．M ethods Thechangesofpromotermethylationof3一OST一2beforeandafter thetreatnlentof5-Aza—dCand／orTSAweredetectedbymethylationspecificPCR (MSP)．ThechangesofmRNAandproteinexpres— sionof3-OST-2 orUHRF1weredeterminedbyrealtimeRT—PCR andimmunocytochemistry．respectively．Results 3-OST一2was completelymethylatedinhepatocellularcarcinomacellsandwaspartiallyreversedby5-aza—dCorTSAal0ne．consistently．mRNA was increasedby2．7一f0ldand4．9一fold．respectively．Afterthetreatmentoftheinhibitorsincombination，3一OST一2methylationwascorn— pletelyreversedandmRNA wassignificantlyincreasedby9．1一fold．UHRF1mRNA andproteinexpressionwerebothinhibitedby5一 Aza—dCorTSA，andTSAwasmoreefficientthan5一Aza—dC (P0．01)．Therewassynergisticeffectbetweenthetwoinhibitors(P 0．O1)．Co