动态固定化方法制备微酶反应器研究初探.pdfVIP

《化学通报》在线预览版 动态固定化方法制备微酶反应器研究初探 王珊珊 李花 李勤 耿利娜 屈锋 邓玉林* （北京理工大学生命科学与技术学院北京 100081） 摘要 本文以固定化人工膜为固定相，胰蛋白酶为固定靶蛋白，利用生物功能化色谱的方法，制备固定 化微酶反应器，并与 HPLC-MS/MS 技术联用，检测目标蛋白牛血清白蛋白、肌红蛋白和细胞色素 C 的酶解 效率。实验初步证明，所制备的新型微柱酶解器具有活性高、稳定性高、催化效率高、酶活性持久、快速再 生及操作简单等优点。 关键词 固定化人工膜 胰蛋白酶 动态固定化 酶解器 Preliminary Study on the Preparation of Enzyme Reactor using the Method of Dynamic Immobilization Shanshan Wang, Hua Li, Feng Qu, Lina Geng, Qin Li, Yulin Deng* (Beijing Institute of Technology, School of Life Science and Technology, Beijing 100081) Abstract In this study, an immobilized enzyme reactor was prepared in capillary by bio-functionalized chromatography method using immobilized artificial membrane as matrix and trypsin as immobilized enzyme. Bovine serum albumin, myoglobin, and cytochrome C were enzymolysised by the immobilized enzyme reactor and detected by HPLC-MS/MS techniques. The preliminary results demonstrated that the activity, stability, and catalytic efficiency of the immobilized enzyme reactor were high. Moreover, its catalytic activity can be retained for a long time and the stationary phase can be reused. Keywords IAM, Trypsin, Dynamic Immobilization, Enzyme Reactor 在蛋白质组学研究的规模化、通量化和集成化过程中，在线酶解是重要的技术之一[1,2]，其研究的关 键是固定化酶解器的制备[3~5] 。本文拟将胰蛋白酶动态固定在固定化人工膜（Immobilized Artificial [6] Membrane ，IAM ）上，利用生物功能化色谱技术 及动态固定化方法，制备微酶解反应器。动态固定化 的酶可在生理环境下维持其构像和活性，提高酶解效率，其吸附过程可以同时达到纯化和固定化的目的 [7] 。 实验中采用专属性较强的 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE ）和 N-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐 酸盐（BAPNA ）作为固定化胰蛋白酶的底物。BAEE 在胰蛋白酶的作用下，生成产物 N-苯甲酰-L-精氨 酸（BA ），BAPNA 在胰蛋白酶的作用下，生成在 410nm 处有吸收的产物对硝基-N-酰苯胺。选用牛血清 白蛋白(BSA)、肌红蛋白和细胞