旋毛虫T668基因转录及表达的时空特性鉴定.pdfVIP

1292 中国兽医学报 2008年 11月 第28卷 第ll期 ChinJVetSciNov．2008 Vo1．28 No．11 旋毛虫T668基因转录及表达的时空特性鉴定 王学林，王心蕊，吴秀萍，孙 磊 ，于中业，李文辉，刘明远 (吉林大学 畜牧兽医学院人兽共患病研究所 人兽共患病教育部重点实验室 ，吉林 长春 130062) 摘要 ：采用RT—PCR和免疫荧光染色技术，分别检测T668基因mRNA及蛋 白在旋毛虫不 同发育时期 中的时空表 达情况。RT—PCR结果显示，该基因从旋毛虫新生幼虫出生即开始转录，随着 日龄的增加，T668基因mRNA逐渐 减少，在感染后 ¨～14dT668基 因的转录趋 于停止。免疫荧光染色结果表 明，在感染后 1d，旋毛虫虫体 即有 T668蛋白表达 ；感染后 6～13d，T668蛋白分泌到肿大的肌细胞核上；14～20d，肿大的肌细胞核上基本观察不到 T668蛋 白，但整个虫体仍有很强的蛋 白表达。这提示在旋毛虫的寄生过程 中，T668基 因的转录及表达呈一定的 时空特点，这可能对旋毛虫包囊形成有着重要作用。 关键词 ：旋毛 虫；T668基 因；RT-PCR；免疫 荧光 中图分类号：$852．731；$855．99 文献标识码 ：A 文章编号：1005—4545(2008)11-1292—04 IdentificationoftranscriptionandexpressionofTrichinellaspiralisT668gene W ANG Xue—lin，W ANG Xin—rui，W U Xiu—ping，SUN Lei，YU Shen—ye，LIW en—hui，LIU M ing—yuan (KeyLaboratoryofZoonosis，A4inistryofEducation，InstituteofZoonosis，CollegeofAnimal ScienceandVeterinaryMedicine，JilinUniversity，Changchun130062，China) Abstract：To explorethetranscriptionandexpressionofTrichinellaspiralisT668 geneduring invasionand nursecellformation，RT—PCR andimmunofluorescencewereusedtoanalyzethetemporalandspatialexpressionpat— ternsofT668inbothmRNA andprotein．RT—PCR analysisshowedthattranscriptionoftheT668geneappearedand maintainedaconsiderablehighlevelatthefirstdaywhenthenewbornlarvaewasborn．W iththeincreaseofage，the levelofT668mRNA reduced．From 11tO14dayspostinfection (d．P．i．)，therewasbarelydetectabletranscription． Immunofluorescenceanalysisindicatedthatintheearlystagesofinfection (from 1tO5d．P．i．)，theincreasedex— pressionoftheT668proteinwaslimitedtothenewbornlarvae．Atalaterstagesofinfection (from 6to13d．P．i．)， thefluorescencespreadtotheTrichinellaandenlargednuclei．From 14to20d．P．i．，thestainingwaslimitedtothe Trichindiaandbarelydetectableinenlargednuclei．Itisconcludedduringtheparasitism processesofnewborn lar— vae，thetranscriptionandexpressionofT668genei