基因重排检测技术操作体会及注意事项.pdfVIP

维普资讯 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2007Aug；23(4) ·485 · · 迈新技术 交流 · 基 因重排检测技术操作体会及注意事项 倪灿荣 ，张太明 ，何妙侠 ，陈 颖 ，朱明华 关键词 ：基 因重~ ；Ig；TCR 点是简便 、经济、省时、敏感、高效、易 自动化等，因而广泛适 中图分类号：R394 文献标识码 ：B 用于临床诊断和科研。 文章编号：11201—7399(2007)o4—0485—02 1．1 酚氯仿法提取石蜡组织DNAl【 (1)10 m厚石蜡切 片 10—15张，置人消毒后 的1．5mlEppendorf管中；(2)脱 I临床表现、形态学、免疫表型以及分子遗传学特征对淋 蜡：二甲苯1200 ，9000r／min，8min×3；(3)脱水：无水 巴组织增生性病变的诊断均具有重要的意义 ，尤其是分子遗 乙醇1200td，9000r／min，5min×3；(4)打开 Eppendorf 传学特征是确定淋巴组织增生性病变的克隆性及其细胞来 管盖子 ，将其置于 37℃烤箱中干燥 1～2h；(5)加裂解液 源的可靠依据。近年来开展的PCR法基 因重排检测技术 ， 100td，混匀后加 20mg／ml蛋 白酶 K(Merck公司)15～20 能从DNA水平更早期、敏感、精确地在亚病理与亚临床阶段 l，间隔震荡，55℃烤箱中过夜 ；(6)观察裂解液是否清亮， 检测出肿瘤性克隆，对淋巴造血组织疾病的良恶性判断具有 否则根据组织量补加蛋 白酶 K3—5 l，继续消化至裂解液 重要意义。该技术 目前已用于淋巴造血组织疾病 良恶性诊 清亮；(7)加500 Tris一饱和酚，混合至乳状 ；(8)离心9 断 、肿瘤性病变的追踪及复发预测等方面。本文就基因重排 000r／min，10min，小心吸取上清夜 ；(9)酚和氯仿各250td， 检测技术和在 日常工作中的操作体会、改进意见、注意事项 混匀，离心9000r／min，5min，小心吸取上清夜；(10)氯仿 以及与病理形态学诊断有关的一些问题做一简单总结。 500td，混匀，离心 9000r／min，5min，取上清夜 ；(11)加 NaAc(醋酸钠 ，3mol／L，pH6．0)70 l，无水乙醇700 l，混 1 Ig和 TCR基 因重排检测方法 匀，一20℃，2h；(12)离心，9000r／min，5min，弃上清夜； (13)70％乙醇 1ml，混匀，清洗；(14)离心，9000r／min，3 基因重排的检测是最近几年来国内外 比较重视的一种 min，弃上清夜；(15)开盖，倒置 Eppendorf管，室温下干燥； 新的病理诊断辅助方法，有助于淋巴瘤的诊断、鉴别诊断和 (16)TE缓冲液(pH8．0)20—30 l，55℃，10min速溶，置 治疗。目前主要有两种基因重排