7细胞工程.ppt

* * 六、干细胞与组织工程 组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。 * 组织工程化皮肤 组织工程化骨骼 组织工程化血管 组织工程化管状器官 组织工程化腺体器官 * * * * * 七、干细胞应用的法律、 伦理道德问题 * [WASHINGTON] The US National Institutes of Health (NIH) could provide funding for research on human embryonic stem cells as early as the spring if new guidelines, published by the NIH last week after widespread public consultation, are formally approved. Nature 402, 566 (1999) [TOKYO] Japans cloning ban will still allow stem cell experiments Nature 404, 321 (2000) [LONDON] European panel rejects creation of human embryos for research Nature 408, 277 (2000) * Stem cell research quidline DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Public Health Service National Institutes of Health National Institutes of Health Guidelines for Research Using Human Pluripotent Stem Cells SUMMARY: The National Institutes of Health (NIH) is hereby publishing final National Institutes of Health Guidelines for Research Using Human Pluripotent Stem Cells. The Guidelines establish procedures to help ensure that NIH-funded research in this area is conducted in an ethical and legal manner. * 3. ES细胞的鉴定 -- 细胞的形态结构 -- 核型分析 -- 碱性磷酸酶（AKP）染色 -- SSEA-I 免疫荧光标记 -- 分化能力检测 体外分化试验 体内分化试验 嵌合体形成试验 核移植试验 * ES细胞形态学鉴定 依ES细胞的形态结构（胞体体积小，核大、有一个或几个核仁）和生长特性（呈克隆状生长，细胞紧密聚集，形似鸟巢，界限不清）对ES细胞进行初步鉴定。 * 核型分析 ES细胞具有正常二倍体核型， 可用核型分析进行检验 * 碱性磷酸酶（AKP）染色 *常用快绿（Fast Green Staining)染色法， *对照以已建系ES细胞（或小鼠的脱带桑椹胚 或囊胚）作为阳性对照， *作用液中不含α-萘酚磷酸钠为阴性对照。 *结果判定阳性对照ES细胞染成棕色，阴性对 照无色。小鼠3．5日龄胚胎ICM为强阳性。 * SSEA-I 免疫荧光标记 第1抗体，SSEA－1（鼠抗ES细胞单克隆抗体），1:100稀释；第2抗体，羊抗鼠 1：10稀释;封闭液，羊抗兔lgG。 步骤①杜氏PBS洗3次,2％Triton作用20 min；