热修复技术在原位杂交中增强组织通透性的对比实验.pdfVIP

维普资讯 临床与实验病理学杂志 JClinE Patho／ 2003Dec；19(6) ■孟性热奎修的周对复晓技军比石术实群在验立夏原春位杂章如松交王中晨增强组织通 【关键词】 原位杂交；热修复 PBS洗 3min×3次；用 0．05％DAB显色液显色 ，镜下控制， 【中图分类号 】 R446 【文献标识码】 B 苏木精衬染后 ，脱水封 固。每组都用 PBS代替杂交液设 阴 【文章编号】 1001—7399(2003)06—0668—01 性对照。 2 结果 核酸原位杂交技术现已广泛应用于基 因表达定位 、定量 分析以及病毒学检测 中，随着探针制备及标记技术 日益完 阳性细胞判断标准 ：阳性定位在细胞核 ，细胞核阳性呈 善，临床诊断及科研 已常规应用原位杂交技术 ，其准确性 明 棕色 +、棕黄色++、棕褐色卅。实验组与对照组结果 ：阳性 细 显优于免疫组织化学技术uJ。目前常规原位杂交技术较多 胞数无明显差异 ，部分对 照组 阳性着色程度稍弱手实验组。 使用酶消化方法来增强组织切片 的通透性 ，但易受浓度 、温 实验组切片组织结构明显，无非特异性着色，背景清晰 ，阳性 度、时间等 因素的影 响，我们应 用免疫组织化学 中热修复技 信号都达到++～卅。 术来取代酶消化方法，取得 了较好的效果。 3 讨论 1 材料与方法 原位杂交技术检测基因表达及病毒学方面，其特异性及 1．1 材料 组织均选 自南京军区南京总医院病理科 临床外 准确性 明显优于免疫组化方法。对 目前原位杂交技术 中应 检标本21例 ，其中Burkitt淋 巴瘤 3例 ，涎腺淋巴上皮癌标 用酸水解 (盐酸液)，清洁剂 (TritonX一100)以及酶消化方 法 本9例 ，霍奇金淋 巴瘤标本 4例 ；尖锐湿疣 5例。所有标本 来增强组织细胞通透性 ，常用的多为酶消化方法 (蛋 白酶 K、 经 10％中性福尔马林液固定 4～12h，常规脱水 ，石蜡包埋 ， 胃蛋 白酶等)，其消化时间、浓度及温度都会影响原位杂交结 每例标本切片 2份 ，分为实验组和对照组 ，切片厚 3～4m ， 果uJ。文献报道运用柠檬酸缓冲液微波加热方法，在节省时 裱于多聚赖氨酸处理的载玻片 ，80℃烘烤 2h。 间等方面取得较好 的效果 l3】。热修 复技术 已广泛使用于 EBV探针 、HPV6／ll探针及试剂盒探针为地高辛标记 ， 免疫组化中，目前 1mmol／LEDTA缓冲液 (pH8．0)高温高 购 自北京中山生物技术有 限公司，抗原修复液为 1mmol／L 压修复方法最为常用 ，而且热修复技术在免疫组化方法中抗 EDTA缓冲液 (pH8．0)，不锈钢高压锅及电磁炉(功率 1500 原修复效果明显好于酶消化方法HJ。故我们应用热修 复方 w)。使用 PBS缓冲液为含有 0．25％ TritonX一100的PBS 法来与酶消化方法进行对 比实验 ，两者无 明显差异 ，均取得 缓 冲掖 。 了较好的效果 ，且热修复方法具有经济方便 、切片处理量大 1．2 原位杂交 切片经脱蜡至水化 ，实验组切片置人盛有 以及易于准确掌握等优点 ，可以取代酶消化方法。热修复方 2000mlEDTA缓冲液 的高压锅中，电磁炉加热至高压阀喷 法处理时要 防止组织脱片，要求组织切片厚薄均匀 ，裱片水 气2min后，移至流水冲洗 ，冷却至室温。对照组用50mg／L 温要掌握好 ，无气泡及皱折。实验缓