新的ZAP-70分析方法在慢性淋巴白血病检测中应用.pdfVIP

of ．474· 中国实验血液学杂志JournalExperimentalHematology2011增刊 态并涂板，挑选10个克隆按照载体设计引物进行PCK泳，结果可见350bp左右片断，说明目的片段与载体已 扩增鉴定(条件：95：C变性30s，55。C退火30s，72。(2延 伸30s，共30循环)，引物为U6一Forward(序列为：圳华大公司测序，测序结果包含目的序列，均设计的 CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA)和CMV—目的序列完全相同，表明载体构建成功。 Reverse(序列为：GTAATACGGTTATCCACGCG)， 结论：成功构建了3对小鼠c-myb基因特异性 阳性克隆产物大小为343bp，阴性为307bp。PCR．产物sh_KNA重组慢病毒表达载体，可进一步用于干扰c-myb 电泳。将鉴定证实的重组载体菌液送华大基因公司测 基因的mRNA转录，从而为制备c-myb基因表达受抑制 序。 的小鼠胚胎干细胞，并进一步研究C—myb在胚胎干细 结果：将PCR产物5肛l上样，1．5％琼脂糖凝胶电胞造血分化中的作用奠定基础。 F029 新的ZAP一70分析方法在慢性淋巴细胞白血病检测中的应用 吴雨洁 南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科 南京210029 目的：ZAP一70在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的 高表达，被认为是CLL的一个重要的预后指标，本室 mean为阴性判断标准。 巴细胞geo 采用流式细胞术(FCM)检测并采用全新的分析方法 结果：采用FCM同时对10例正常人B淋巴细胞 判断CLL患者中CD5+CDl9+细胞中ZAP-70表达，建ZAP一70分析geo 立一种判定ZAP-70表达的更为规范可信的分析方法。示geo 方法：1．采用三色抗体组合CDS-FITC／CD38- PE／CDl9一PerCP以及四色组合CD3+16+CD56- FITC／ZAP一70一PE／CD1 62 9一PerCP／CD5-APC检测1 例eLL患者骨髓或外周血白血病细胞ZAP-70，CD38 的表达，其中男105例，女57例，中位年龄：64．7岁方法2笋0 (3484岁)，CD38结果采用百分比表达，CD5+CDl9+ 中(eLL细胞)CD38，20％为阳性。ZAP-70采用两种检 测方法：方法1：以CD3+CD5+T淋巴细胞，作为 ZAP-70的阳性控制，再提取cD5+cDl9+(cLL肿瘤细 胞)并分析乙婶一70的表达率，zAP一70≥20％为阳性。2． 首先检测10例正常人外周血CDl9+B淋巴细胞中zAP一 70的表达，将通道数分辨率从方法1的1024改为256，分 别比较几何平均荧光强度(geomean)、平均荧光强度 mean (mean)和中位值(median)几个参数，结果显示geo 数据最为稳定。ZAP一70结果采用百分比(方法1)和几何 平均荧光强度@omean)(方法2)两种方法比较结果，方570)。此10例采用方法1ZAP一70表达均为在15％-25％。 法2为将荧光通道分辨率设为256，每次对患者检测时， 均以正常人样本为对照，将正常人B淋巴细胞设定在 预后指标，均可采用流式细胞术检测。CD38表达在胞 mean是否为109后，膜，采用FCM检测方便，可信度高。ZAP-70位于胞 65，同时验证患者T淋巴细胞geo 浆，在eLL肿瘤细胞中表达较弱，阴阳性难以界定， 进一步检测患者CD5+CDl9+细胞ZAP-70的表达。geo of 中国实验血液学杂志JournalExperimentalHe