胚胎性别鉴定技术在奶牛快速繁育中应用.pdfVIP

特邀专题报告 o45 ZT02010 胚胎性别鉴定技术在奶牛快速繁育中的应用 刘 李树静2‘毕江华1冯春涛1 潇1余文莉2杨金峰3 (1．北京安伯胚胎生物技术中心，北京100107；2．石家庄天泉良种奶牛有限公司，河北石家庄050051； 3．内蒙古赤峰市克什克腾旗农牧业局改良站，内蒙古赤峰050051) 摘要：奶牛PCR)l丕胎性别鉴定技术因其鉴定准确性高，对胚胎伤害小，可在生产现场应用，技术发展成熟等优点 越来越受到人们的关注。在同一繁育周期中，使用性别鉴定胚胎不仅对移植妊娠率无显著影响，而且可明显提高产母犊 的数量。性另1鉴定胚胎移植后可扩繁奶牛群体数量是常规胚胎的2倍，是性别控制胚胎的1．2倍以上，实现了奶牛快速繁 育的目标，并具有可观的经济效益。胚胎取样细胞的数量影响，陛别鉴定产犊准确率，取样数大于等于5个细胞组的产母 妊娠率和切取5-8个细胞胚胎的移植妊娠率均无显著差别(42．80vs48．54)(49．72vs54．55)(PO．05)。 关键词：胚胎性别鉴定；取样细胞数；妊娠率：快速繁育；奶牛 胚胎移植技术在奶牛育种和高产群扩繁方面有着其他技术不可替代的霞要作用。但传统的胚胎移植 技术由于出生犊牛公母各半，加上只有近50％的移植成功率，使该技术在生产应用过程中长期面临成本 高、效率低的窘境。这促使人们不断研发，试图找出可以控制牛胚胎性别的有效途径。 labeled)与从胚胎的lo个细胞中提 1989年Bondilli掣u首次报道用放射性探针标记物(Radioactively 色体特异性系列后经电泳成功对牛胚胎进行了性别鉴定。Hasler于2002年【4】应用此种方法对7．8口龄的 3,964枚体内胚胎及1181枚体外胚胎进行了性别鉴定，在妊娠后经B超测试获得的准确率为雄性为98．7％、 雌性为94．4％。目前，经过科学工作者们对此项技术不断的发展改进，使胚胎性别鉴定技术的效率及雌 性准确率获得了显著的提高。 胚胎性别鉴定技术可使出生的胚胎牛全是母牛，在生产上能节省一半的受体牛，对提高胚胎移植的 实用价值会产生重大影响。我们经过近8年的研发和推广，建立了“双引物一步扩增”PCR牛早期胚胎 性别鉴定技术，截JE2009年，应用该技术共获得9113头母犊，同时，使从取样到出结果的整个技术流程 控制在3d,时内，雌性准确率在98％以}。本文将近几年我们对胚胎性别鉴定技术在奶牛繁育中的应用 做一总结报告，从而客观评价这一技术的实用价值，并提出未来技术改良和发展的方向。 材料与方法 1 材料 1．1实验动物高产荷斯坦母牛做供体，中、低产荷斯坦母牛及黄牛做受体。 1．2仪器体式显微镜、倒置显微镜、胚胎分割仪、PCR仪、电泳仪、相机。 Ii laL 1．3耗材和溶液六孔平皿(AB公司)、由35mm平皿、切割平皿(AB公司)、2L取样吸头、200 1．t L 普通点样吸头、100 存液、YCD扩增反应混合物(AB公司)。雌性和雄性扩增对照样品(AB公司和自制)。 2鉴定胚胎性别方法 46蟋》2011年学术年会 2．1胚胎分割取样利用胚胎分割仪切割桑椹胚到扩张囊胚5—8个细胞，将其放入装有81aL超纯水的样 品分析管中。 2．2 PCR扩增及电泳结果分析 胞样品进行PCR扩增，再通过扩增样的电泳结果鉴定胚胎性别。能同时扩增出两条带：雌雄共有的常染 色体基因片段和Y一染色体上相应片段胚胎即为雄性胚胎；只能扩增出共有基因片段胚胎即为雌性胚 胎。 结果 1 取样细胞数对性别鉴定雌性胚胎产犊准确率的影响 表1取样细胞数对性别鉴定雌性胚胎产犊准确率的影响 注：同一栏数值中具有不同字母上标示差异极显著(尸0．01)。 表1中，取样细胞为14个组的产犊率为88．10％，而取样大于或等于5个细胞组产犊准确率为98．47％， 高于取样小于5个细胞组，差异极显著