应用HPLC液闪联用技术测定浮游植物不同类群对初级生产的贡献.pdfVIP

应用HPLO与液闪联用技术测定 浮游植物不同类群对初级生产的贡献 徐松立黄邦钦 厦门大学近海海洋环境科学国家重点实验室、海洋与环境学院，厦门361005 浮游植物不同类群的生产能力是不同的，虽然有些类群生物量高，但并不代表其生产力高。 在生态系统的物质循环过程中，生产力比现存生物量更为重要，生产力反映了物质循环的速率。 因此，研究不同浮游植物类群对初级生产的贡献对研究浮游植物群落在生物泵和碳的生物地球 化学循环中有十分重要的意义。 高效液相色谱与液闪联用法(HPLC-LSC)是一种很有用的研究现场微型藻类的比生长速率 的方法，其原理是基于浮游植物不同类群所含特征光合色素的光合合成机理，用Chla和类胡 Calvin—Benson循环进入用于合成光合色素的小分子前体，在稳定的条件下，光合色素的合成速 率等于浮游植物的固碳速率。由于14c示踪的高灵敏和准确性，能准确测量出在某一时间段内 浮游植物合成光色素所固定的14c，进而推算出浮游植物各类群的初级生产力。用高效液相色 谱仪(HPLC)分离收集浮游植物各类群的特征色素峰，纯化后进入液体闪烁计数仪测量放射性 活度。这种方法可近似的确定混合水体中不同的浮游植物的生长速率。(如硅藻，隐藻，蓝细 菌，定鞭金藻等。) 在实验室进行单种培养和现场自然群落培养。实验室的培养主要选择硅藻(中肋骨条藻和 威氏海链藻)、定鞭金藻、东海原甲藻等几种常见藻，培养体积250ml，光照强度130uEm之s2， Ci 温度25℃，光照：黑暗时间为12h．-12h，引入100u 14C《NaHl4C03)，选用班培养基。培养 结束后收集过滤于GF／F膜上，放入低温冰箱保存。现场的培养选取生物量最高的表层或DCM p 层，取水4L，引入200一--400 12h：12h)，达到14c能充分结合到合成色素的前体中，收集于GF／F膜上，冰冻保存至分析。 用DMF(二甲基乙酰胺)提取样品，通过离心、定容等步骤最终提取200uI样品进入HPLC分 中和)来提高光合色素的化学放射性纯度。HPLC分离色素的过程中，无色物质中也含有放射 性物质，但其在我们的HPLC分析方法中不与色素峰为共出峰，不会影响对色素中的14C的定 量。 黄海和东海进行28个测站的培养实验，初步的结果表明，HPLC峰谱中硅藻特征色素一岩藻黄 它光合色素峰则不明显，各光合色素所对应的放射性活度在100—300 dpm之间，能达到LSC 的检测限。HPLC．LSC法能比较可靠的测量出海洋微型藻类常规光合色素中合成的14C的放射活 度，因此在测量现场海洋中浮游植物不同类群的比生长速率上能得到很好的应用。