先天性心脏病患者转录因子Nkx2.5基因突变观察.pdfVIP

山东医药2008年第48鲞箜 先天性心脏病患者转录因子 Nkx2．5 基因突变观察 李开如，丁建东 ，张晓黎。姚玉宇，任利群，马根 山 (东南大学附属 中大医院，江苏南京 2l0009) [摘要] 采用聚合酶链反应结合 DNA测序技术 ，对 99例先天性心脏病 (CHD)患者及90例正常对照者的 Nkx2．5基因外显子 1进行序列检测。结果显示，3例室间隔缺损、7例房间隔缺损、1例肺动脉瓣狭窄、1例动脉导管 未闭患者和3例对照者的Nl()(2．5外显子 1第239位发生了A．G的突变。认为转录因子 Nl()2【．5基因突变与中国 CHD的发生有一定的关系。 [关键词] Nl()2【．5基因；先天性心脏病；基因突变 [中图分类号] R541．1 [文献标识码] B [文章编号] lO02—266x(2oo8)33-0o83—02 先天性心脏病 (cHD)的发病率 占新生儿 的 0．25 g，10×反应缓冲液5 ，dN1P3 l，上、下游引 0．4％ ～5％ l1]病因迄今仍不清楚_2J。但研究认为 物各 l ，Taq酶 1．25u。扩增条件：预变性95℃2 ， cHD是由遗传因素和环境因素共同作用导致心脏 min，变性 95℃45s，退火61qC3Os，延伸 72cC45 血管发育异常所引起的，遗传度为55％～65％。并 s，终延伸 72℃ 10min，35个循环。产物用 2％琼脂 证实多种转录因子与心脏发育紧密相关，包括 GA 糖凝胶 电泳，EB染色，紫外光下鉴定。④ DNA测 TA_4、Nkx2．5、rrBx5、AP．2b等。本研究从分子水平 序：所有PCR扩增产物均采用DNA胶回收试剂盒进 观察了 CHD患者的Nl()(2．5基因突变情况，初步探 行纯化，在全 自动 DNA序列分析仪上进行序列测 讨其与cHD发病的关系，为 cHD的产前诊断和基 定。结果同GenBanl(人 Nkx2．5编码序列进行比较， 因治疗提供依据。 不一致者重新 PCR扩增后作反义链测序验证。 1 资料与方法 1．3 统计学方法 采用 SPSSl3．O统计软件 。数据 1．1 临床资料 2006年 2月～2007年2月东南大 比较用 。检验。P≤0．05为差异有统计学意义。 学附属 中大医院收治的 CHD患者共 99例，男 38 2 结果 例，女61例；年龄 1～65岁。包括室间隔缺损 (VsD) 2．1 PCR检测结果 PCR产物点样于琼脂糖凝胶， 24例、房间隔缺损(ASD)35例、肺动脉瓣狭窄(PS)l3 电泳后，紫外灯下可见 目的片断。 例、动脉导管未闭(PDA)21例、复杂 CHD6例，均 由 2．2 DNA测序结果 在 3例 VsD、7例 ASD、1例 彩色超声心动图或心脏介入检查及外科手术证实。 PS、l例 PDA患者和 3例正常对照者中发现 Nkx2．5 选择性别、年龄与 cHD患者相匹配的正常人90例 外显子 1的第 239位发生了A—G的突变，重新 PCR 为对照组，其 中男42例 ，女48例；年龄 12～64岁。 扩增后作反义链测序验证 了上述结果。CHD组及 均经彩色超声心动图检查排除 cHD。该研究经伦 ASD组与正常对照组相 比，P均 0．o5。 理委员会批准并获取研究对象的知情同意。 3 讨论 1．2 检测方法 ①DNA制备：抽取受检者外周血 5 人类 Nkx2．5基因亦称心脏特异性 同源盒基因 II1l，EDTA抗凝，用常规饱和酚一氯仿法提取基因组 (Csx)，是一类同源盒转录因子，位于染色体 5q34 DNA。② 引物设计：根据 mer3软件及相关文 35，总长度为3125bp，其有2个外显子，cDNA全长 献[3]设计Nk)(2．5基因的外显子 1引物。引物序列： 1585bp，编码含 324个氨基酸的蛋 白质，是NK型同 上游 引 物 CGGCACC cAGG