一种从石蜡包埋组织中快速提取DNA的方法.pdfVIP

· 590 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2010Oct；26(5) 一 种从石蜡包埋组织中快速提取 DNA的方法 张惠丹 ，任 辉 ，王晓楠 ，方 瑾 摘要：目的 建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法 将一片 10 m厚石蜡包埋大肠癌 组织切片直接浸入 150ttl消化液中，56℃孵育0．5h、1h和2h，灭活蛋 白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶 电泳检测所提取DNA的片段分布，紫外分光光度法测定DNA的产量及纯度。以提取的DNA为模板，PCR扩增不同长度产物 片段并进行产物的直接测序以评价提取方法。结果 该提取方法能够获得较长片段的基因组 DNA，从一片 10 m厚石蜡切 片中即可获得大约60 g的DNA，在0．5h消化条件下获取的模板DNA，即可实现对 152bp、293bp、392bp和541bp等4种 不同片段的 100％扩增，1h消化组的PCR产物可直接用于DNA测序。结论 建立了一种简单 、快速地从 甲醛固定石蜡包埋 组织中提取DNA的方法，只需一步消化即可获得满足普通PCR及测序需要的基因组DNA。 关键词：甲醛固定；石蜡包埋组织；DNA提取；聚合酶链式反应 (PCR) 中图分类号：R446．8；R394．2 文献标识码：A 文章编号：1001—7399(2010)05—0590—04 A methodforrapidDNA extractionfrom formalin．fixedparaffin．．embeddedtissues ZHANGHui—dan ，REN Hui，WANGXiao—nan ，FANG Jin (1DepartmentofCellBiology，KeyLaboratoryofCellBiology，MinistryofPubl~Health，andKeyLaboratoryofMedicalCellBiology， MinistryofEducation，ChinaMedicalUniversity，Shenyang J10001，China；DepartmentofColonSurgery，ShenyangAnalRectumHos— pital，Shenyang 110002，China) Abstract：Purpose Toestablishapowerfulone—stepmethodforrapidDNA extractionfrom formalin—fixedparaffin—embeddedtissues． M ethods One10 xIm archivaltissuesectionwasdirectlyplacedintothedigestionbufferwithoutanypretreatmentandincubatedat56 ℃ for0．5h．1hand2hrespectively，andthensubmittedtoinactivationofproteinaseKandcentrifugation．GenomicDNA intheSU— pernatantwasquantifiedandqualifiedbyDNA electrophoresis，spectrophotometryandusedasthetemplateofpolymerasechainreac— tion，followedbyDNA sequencing．Results Thismethodextractedabout60 gofDNA withhighmoleculeweightfrom one10 m section，andproduceda 100％ amplificationSuccessrateforfragmentsof152bp，293bp，392bpand541bpeventhoughinthe0．5 hgroup．SequencingresultsofPCR productsinlhgroupshowedlow levelbackrgoundnoiseandsatisfiedsignal—to—noiseratio．Con- clusions ThissimplifiedandcostDNA extractionmethodcanextracthigh·y·ieldDNA rapidlyrfom formalin—·fixedparaffin—e·mbedded tissuesandachievespecificPCR productsavailabletomeettheneedofDNA sequ