黄瓜子叶外植体组培成株研究.pdfVIP

北方园艺2008(6)：187～189 ·生物技术· 黄瓜子叶外植体组培成株研究 汪祖程，何 丹，徐跃进 (国家蔬菜改良中心华中分中心；园艺植物生物学教育部重点实验室，华中农业大学园艺林学学院，i／Ht．武汉430070) 摘要：采用正交试验设计，研究了不同激素浓度组合对黄瓜子叶离傣再生的影响。结果表 KT+0．3NAA+0．1 明：愈伤组织诱导培养基为MS+1．0mg／L6一BA+(1．O～1．5)mg／Lmg／L mg／L2，4一D；不定芽诱导培养基为MS+6-BAl．5 rag／L，再生芽移入生根培养基 mg／L+NAA0．3 (MS+o．1 mg／LNAA)生根培养，40～60d可得到完整再生植株。另外，在所有组合中。6-BA浓 度1．5 mg／I。时，愈伤组织诱导率低，并且出现了愈伤化现象，引起器官直接分倘 关键词：黄瓜；子叶；植株再生；正交设计 中图分类号：S sativus 黄瓜(CucumisL)是二种重要蔬菜。由于其 1．3愈伤组织分化 遗传基础较狭窄，利用基因工程将是今后黄瓜品种改良 愈伤组织分化培养基采用MS基本培养基，分别添 加NAA(0．1,0．2,0．3 mg／ 中重组远缘有用基因的有效手段。成功地进行组织培 rag／L)和6-BA(1．5、2．O、2．5 养，对于黄瓜转基因等研究十分必要。目前，对黄瓜再 L)共9个处理，培养条件相同。 生体系的研究已有一些成功的报道D-s]，但再生仍相对较 表1 试验因子及水平 面L 难，不仅基因型影响较大，不同的激素组合对再生频率 也有影响，并且重复性也较差。试验以黄瓜为材料，采 用正交设计法，旨在明确不同植物激素及其不同浓度的 组合对黄瓜愈伤组织诱导和生长的影响，对黄瓜愈伤组 织诱导和生长的条件进行筛选，为今后黄瓜遗传转化体 系的建立提供理论和技术基础。 1材料与方法 将不定芽从外植体上切下转接于伸长培养基Ms+ BA 0．05 cn3．的小植株分开，转接予 mg／L，再将长至l～2 1．1材料及外植体的选择 0．1 黄瓜品系为X(B6，由华中农业大学黄瓜课题组提生根培养基上，生根培养基采用MS和MS+NAA mg／L。约7～10d，植株有根长出，7d后根系分支较多， 供。外植体为种子萌发的无菌苗子叶。将种子去皮后， 即可练苗移栽。 用75％酒精消毒60S，升汞灭菌7～8min，无菌水冲洗 1．5小苗的移栽 3—5次后，接种到固体1／2MS培养基(加30％蔗糖+ 当小苗根系发育到一定程度后，将三角瓶打开，取 0．8％琼脂，pH值为5．8)，先置于组培室内(25℃)暗培 出小苗，洗净根部培养基，小心移植于小花盆灭菌土中 养1～2d，然后光下培养(昼、夜16h／8h，25