T-RFLP微生物监测技术及矿场应用研究.pdfVIP

油气地质与采收率 2005年8月 PETROLEUMGEOLOGYANDRECOVERYEFFICIENCY第12卷第4期 T—RFLP微生物监测技术及矿场应用研究木 赵凤敏 胜利油田有限公司采油工艺研究院 摘要：运用基于聚合酶链式反应的分子生态学监测技术，分离和纯化了油藏产出液中微生物的总DNA，以纯化的 DNA样品为模版扩增出代表油藏微生物种群特征的16SrDNA，然后进行基因末端限制性片断长度多态性的分析， 建立了分子水平的油藏微生物监测方法，为微生物驱矿场试验中注入功能菌的跟踪分析提供了快速、简便、可靠的 监测手段。文章介绍了T—RFLP微生物监测技术在罗家油田罗801块微生物驱油现场试验中的应用情况。 关键词：16SrDNA；微生物；基因；监测；T—RFLP；罗家油田 中图分类号：TE357．9 文献标识码：A 分子结构上高度保守，只在某些位置有少量的核苷 引言 酸序列改变，而且这些位置的改变有属或种特异 性LJ71。其所含信息较多，约含1500个碱基对，长度 T—RFLP(TerminalRestriction FragmentLength又较适中，且每个细胞内有高拷贝数的16SrDNA， Polymorphism)监测技术是在聚合酶链式反应因此，16SrDNA更适合于微生物生态的研究坤J。 (PeR)技术的基础上发展起来的基因检测技术。自 1985年美国Mullis发明了PCR技术并成为体外扩基础，将PCR引物中的一条加以荧光标记，扩增产 物16S 增DNA的方法后，该技术在基因重组和分子克隆研 rDNA用合适的限制性内切酶酶切，形成一 究中得到了广泛应用【1J。由于DNA序列分析周期系列末端荧光标记的16SrDNA片段。经毛细管电 长、费用高，在PCR基础上发展的T—RFLP技术，泳分离后，根据片断的长度在核糖体数据库(RDP) 进一步提高了DNA检测的效率。Ku等使用T—中进行相关性检索，获得与片断长度相应的油藏微 RFLP技术确定了微生物群落的遗传多样性怛J，生物的种属特征，然后结合毛细管电泳测得片断的 1997年，吉林油田与13本合作研究了PCR—RFLP相对峰面积，确定油藏微生物群落的结构及组成多 技术在现场微生物菌种DNA监测中应用的可行样性一J，从而准确分析微生物采油过程中注入功能 性口J。本文应用T—RFLP技术监测了油藏中注入菌的丰度及变化。通过监测结果，确定注入功能菌 功能菌的生长繁殖状况、丰度及其动态变化。 在油藏内的生长、繁殖状况及其在油藏微生物生态 环境中的地位，为微生物采油现场实施工艺的调整 1监测原理 和优化提供理论依据。 核糖体核糖核酸(rRNA)存在于所有的生物中， 2监测方法 是细菌和真核细胞核糖体的基本组成部分，编码细 23S5S 菌rRNA的基因是按5’16S3’方式排列 2．1油藏产出液取样及样品处理 的【4J，5S，16S和23SrRNA的拷贝数相同J。不同 监测水样取自罗家油田罗801块微生物驱油矿 的微生物其rRNA基因序列在某些位点会以不同的场试验区的产出液，置于4。C冰箱中保存待用。产 几率发生突变，但它们又具有高度的保守性，有“细 出液样品除油后，取1L水样经0．2灿m微孔滤膜过 rDNA基因滤收集菌体，提取总DNA。 菌化石”之称旧J。编码16SrRNA的16S 收稿日期2005—04—23；改回日期2005—06一15。