5真核生物基因表达和调控.ppt

第五章 真核生物基因表达与调控 与DNA甲基化作用相关的三种酶 ? 构建性甲基化酶: 在新位点通过识别特异序列识别DNA，它只作用于非甲基化位点； ? 维持性甲基化酶: 作用于半甲基化位点，把它们转变成完全甲基化位点。 ? 去甲基化酶 ：负责去除甲基。 DNA甲基化抑制基因转录的机理 作用机理： DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。 启动区DNA分子上的甲基化密度与基因转录受抑制的程度密切相关。 修饰作用与染色质状态的关系： 组蛋白的乙酰化（与基因活化有关） 组蛋白的甲基化（与基因失活有关） DNA的甲基化 （与基因失活有关） 真核启动子间不像原核那样有明显共同一致的序列，而且单靠RNA聚合酶难以结合DNA而起动转录，而是需要多种蛋白质因子的相互协调作用。 真核启动子一般包括转录起始点及其上游约100~200bp序列，包含有若干具有独立功能的DNA序列元件，每个元件约长7~30bp。 原核生物 TTGACA --- TATAAT------起始位点 -35 -10 真核生物 增强子---GC ---CAAT----TATAA—5mGpp—起始位点 -110 -70 -25 哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件 ① 核心启动子 (core promoter )　：指RNA聚合酶起始转录所必需的最小的DNA序列，包括转录起始点及其上游-25~ -30bp处的TATA盒。TATA盒位置极为保守，是许多通用转录因子的装配位点。 核心启动子单独起作用时只能确定转录起始位点和产生基础水平的转录。 二、调节真核基因转录的顺式作用元件(cis-acting elements) 真核基因的顺式调控元件是基因周围能与特异转录因子结合而影响转录的DNA序列。 其中主要是起正性调控作用的顺式作用元件，包括启动子(promoter)、增强子(enhancer)；近年又发现起负性调控作用的元件沉默子(silencer)及绝缘子（ insulator ）。 是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物。 增强子通常占100~200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8~12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 ①增强子提高DNA链上基因转录效率，可以远距离作用，通常可距离1~4kb、甚至30kb仍能发挥作用，而且在基因的上游或下游都能起作用。 ②增强子作用与其序列的正反方向无关，将增强子方向倒置依然能起作用。 糖皮质激素受体 结构特点： 蛋白质分子的肽链上每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基。Leu出现在α-螺旋疏水的一侧，并直线排列。 两个蛋白分子的α-螺旋之间依赖Leu残基之间的疏水作用形成一条拉链。 二聚体的另一端的肽段富含碱性氨基酸残基，借其正电荷与DNA双螺旋链上带负电荷的磷酸基团结合。 两个蛋白分子靠疏水力结合成二聚体。若不形成二聚体则对DNA的亲和结合力明显降低。 共同点：它们之间并不存在较为明显的氨基酸序列的同源性，却都含有高比例的酸性氨基酸，产生出很强的净负电荷。 例如：糖皮质激素受体蛋白质17/82. 例：在组成型表达的转录因子Sp1的两个最强的激活域中，谷氨酰胺几乎占了25%，而带负电菏的氨基酸比例则非常低。 与CAAT元件结合的组成型转录因子CTF/NF1，转录激活域位于转录因子的C-末端，其中酸性氨基酸及谷氨酰胺所占比例都很低，但含大量的脯氨酸，约占该区域的1/4。 3.螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)　 结构特点：含有两个α螺旋,被不同长度的连接区隔开(环)，借助两个螺旋对应面上疏水基团的相互作用形成二聚体。 在免疫球蛋白κ轻链基因的增强子结合蛋白E12与E17中， α螺旋的N端一侧有碱性区。其DNA结合性质与亮氨酸拉链有相似之处，都包含与DNA结合的碱性区和形成二聚体的两性α螺旋，因而也常被称为碱性螺旋-环-螺旋（bHLH ） HLH基元附近有个高度碱性的区段为结合DAN所必须 bHL