2型与5型血清型重组溶瘤腺病毒介导HSP基因抗肿瘤效应比较.pdfVIP

2型和5型血清型重组溶瘤腺病毒介导HSP基因抗肿瘤 效应比较1 1 1 2 1 2 2 1 陆琴 ，叶迅 ，赵毅 ，任臻 ，梁旻 ，胡放 ，陈红专 1 上海交通大学医学院药理学教研室，上海（200025 ） 2 上海三维生物技术有限公司，上海（201206 ） E-mail:yaoli@ 摘 要：目的：比较2型和5型血清型溶瘤腺病毒携带HSP基因对人和小鼠肿瘤细胞杀伤作用。 方法 分别构建携带Hsp70表达框的2型和5型血清型两种溶瘤腺病毒载体Ad5.HE和Ad2.HE ， 用ELISA法检测病毒感染后肿瘤细胞中热休克蛋白的表达；用MTS法检测病毒对肿瘤细胞的 杀伤；以及建立荷B16 黑色素肿瘤C57 小鼠模型，观察病毒对小鼠生存期的影响。结果： Ad5.HE和Ad2.HE感染人肿瘤细胞后，细胞内Hsp70 的表达水平和对细胞杀伤作用无显著差 异。Ad2.HE病毒感染B16细胞后，细胞内Hsp70的表达水平较Ad5.HE病毒显著提高，但对B16 细胞的杀伤作用无显著性差异。在荷B16 黑色素肿瘤C57 小鼠模型中，Ad2.HE 病毒组较 Ad5.HE病毒组能显著延长小鼠的生存期。结论：携带HSP基因的2型重组溶瘤腺病毒较5型 重组溶瘤腺病毒在B16黑色素瘤细胞内能表达较高的HSP ，并更明显延长荷B16黑色素瘤小 鼠的生存期。提示重组溶瘤腺病毒基因治疗策略应考虑血清型的不同。 关键词：溶瘤腺病毒；热休克蛋白；黑色素瘤；血清型 中国图书分类号 R966 ；R967；R968 基于免疫学标准的人血清型划分，目前将腺病毒分为三个属，进一步划分为6个亚群。 在腺病毒为载体的肿瘤基因治疗中，最常用的腺病毒载体是C亚群中的2型和5型腺病毒[1] 。 这两型复制能力很强的腺病毒在DNA序列上有高达96%的同源性；但在鞭毛等与腺病毒感染 能力相关的结构上仍然存在差异[2,3] 。目前，大部分实验研究采用5型腺病毒为载体，而2型 腺病毒作为肿瘤基因治疗载体的有效性报道不多。本研究分别以C亚群2型和5型腺病毒为载 体，构建携带HSP基因的重组溶瘤腺病毒Ad2.HE和Ad5.HE ，通过体内和体外试验比较这两 型腺病毒的异同，探讨2型和5型重组溶瘤腺病毒载体在肿瘤基因治疗有效性。 1．材料和方法 1.1 材料 1.11 菌株、工具酶及试剂 E.coil 菌株感受态细胞 DH5 、BJ5183 由上海三维生物技术有限公司提供。常规限制性 内切酶为Bio-Lab 公司产品，T4-DNA 聚合酶、T4-DNA 连接酶、硷性磷酸酶为Takara 公司 产品。DMEM 高糖培养基、0.25%胰酶（含0.02%EDTA ）、PBS 缓冲液、Lipofectamine 试剂 盒均为Gibco 公司的产品。胎牛血清为Hyclone 公司产品。Pronase 裂解液为Roche 公司的产品。MTS 试剂购自Promaga 公司。Hsp70 ELISA 检测试剂盒购自Stressgene 公司。 1.1.2 细胞系及病毒 实验中选用肿瘤细胞系：人肺癌细胞系：A549 (ATCC CCL-185) ；人肝癌细胞系：Hep3B (ATCC HB-8064), PLC/PRF/5(ATCC CRL-8024) ；人乳腺癌细胞系：ZR-75-30 (ATCC 1高等学校博士学科点专项科研基金资助课题, No 20040266003。 - 1 - CRL-1504) ；小鼠黑色素瘤细胞株：B16 (ATCC CRL-6322) ；人胚肾细胞株：HEK-293 (Microbix, Toronto, Canada)腺病毒转化的人胚肾细胞株被应用于腺病毒生产制备。所有细胞培养基和添 加物均来自Life Technologies公司Gibco-BRL (Carlsbad, CA) 。所有细胞均用