实验5-植物体内硝态氮含量的测定.pptVIP

实 验 5 植物体内硝态氮含量的测定 一、实验目的 1、学会植物组织中硝态氮含量的测定方法； 2、了解植物组织中硝态氮的含量。 二、实验原理 在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。 三、实验器材 1、材料：小麦根，叶柄，叶片 2、仪器：分光光度计 3、试剂： 500mg/LNO3- 标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.9026 克溶于无离水中，定容至250ml。??? 5%水杨酸一硫酸溶液 称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。???? 8%氢氧化纳溶液 称取80克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。 四、方法步骤 1.标准曲线绘测： （1）吸取500mg/L NO3- 标准溶液1ml、2ml、3ml、4ml、6ml. 8ml、10ml、12ml分别放入50ml容量瓶中，用无离子水定至刻度，使之成10、 20、30、40、60、80、100、120mg/L系列标准溶液。???? （2）吸收上述系列标准溶液0.1ml，分别放入刻度试管中，以0.1ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml 5%水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后再加入8%NaOH溶液9.5ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为10ml。 （3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。以NO3- N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 2.组织液NO3-N的提取 （1）样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2g左右，重复三次（根，叶片，叶柄），分别放入三支试管中，加入10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30min，到时间后取出，用自来水冷却，再将提取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，定容至刻度。??? （2）样品液的测定：分别吸取样品0.1ml分别于三支试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室温下20min，再慢慢加入9.5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测其吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO3- N浓度，再用下公式计算其含量。 NO3-N(mg/g)=(C ×样品液总量)/样品鲜重 C- NO3-N浓度 五、实验思考 试讨论植物不同部位硝态氮的分 布特点。