实验9-过氧化氢酶活性测定.pptVIP

一 实验目的 二 实验原理 三 实验器材 10%H2SO4； 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液； 0.1mol/L KMnO4标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L 草酸溶液标定； 0.1mol/L H2O2：取30%H2O2 （17.6mol/L）溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）标定。 * * * * 实验10 过氧化氢酶活性测定 （高锰酸钾滴定法） 掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理和方法； 2 了解过氧化氢酶的作用。 过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。 反应式 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 1　试剂 2　材料:小麦叶片 3　主要设备：离心机，恒温箱，酸 式滴定管 四 方法步骤 1、 酶液提取 取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000转离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 2 、滴定：取50mL三角瓶3个（2个测定，另1个为对照），测定瓶中加入酶液2.5mL，对照加煮死酶液2.5mL，再加入0.1mol/L H2O2 2.5mL ，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5mL。? 3、用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30s内不消失）为终点。