急性脊髓损伤蛋白质的双向电泳分析和质谱鉴定.pdfVIP

—738 — Chin J Lab Diagn ,July ,2006 ,Vol 10 ,No. 7 ( ) 文章编号 :1007 - 4287 2006 07 - 0738 - 05 急性脊髓损伤蛋白质的双向电泳分析和质谱鉴定 赵宝林 ,杨小玉 ,朱庆三 ,尹 　飞 ,臧 　虎 ,孙 　庆 ,段德生 (吉林大学中日联谊医院 骨科 ,吉林 长春 130033) 摘要 : 目的　建立急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱 ,初步观察急性脊髓损伤组织中蛋白质组的变化与差异表达 , 为进一步探讨急性脊髓损伤分子机制奠定了基础 。方法 　采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白,银染显色 ,Image Master ( ) 图象分析系统分析 ,从胶中选取分离蛋白质点 ,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 MALDITOFMS 分析获取肽质 ( ) 量指纹图谱 PMF ,Mascot 软件搜索 MSDP 、SWISSPROT 数据库鉴定蛋白质 。结果 　获得重复性和分辨率较好的脊髓 双向凝胶电泳图谱 。质谱分析了 12 个蛋白质点 ,获取 6 张肽质量指纹图谱 。通过查询数据库鉴定了 9 个蛋白质 。通 过对过表达脊髓损伤中蛋白质表达谱改变的研究 ,鉴定出9 个差异表达蛋白质 ,这些蛋白质包括等 。这些差异蛋白质 α α 涉及基因为上调蛋白钙蛋白酶 Calpain 、神经丝蛋白M Neurofilament triplet 1糖蛋白 1Acidglycoprotein 、Oxygen regulated protein 1 在脊髓损伤组下调 。钙蛋白酶抑制剂 Calpain inhibitor ,假象蛋白10 Hypothetical protein cgi10 在脊髓损伤组消 失 。并在损伤组出现新蛋白预测蛋白Hypothetical 152. 1 kDa protein 和核内寡聚肽酶 Endooligopeptidase A related protein 。 结论 　成功构建脊髓损伤与正常脊髓双向凝胶电泳图谱 。并应用质谱技术鉴定了特异蛋白质点 。在我们所鉴定的 脊髓损伤过程中发生最显著变化的蛋白质中 ,有 7 种蛋白具有与一致的变化趋势 ,其中钙蛋白酶 、神经丝蛋白、神经营 ( ) α 养素低亲合力受体 p75NTR 、1糖蛋白、氧调节蛋白 1 、钙蛋白酶抑制剂 、假想蛋白10 表达上调 、下调与消失变化在脊 髓损伤中居极其重要地位 。 关键词 :脊髓 ;蛋白质组 ;双向电泳 ;质谱仪 中图分类号 :R318 文献标识码 :A Proteome research of acute spinal injury by twodimensional gel electrophoresis analysis and mass spectrometry identification 　ZHAO Baolin , YANG Xiaoyu , ZHU Qingsan , et al . ( Department of orthopaedics chinaJapanese fri