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Klotho基因功能研究进展 　　作者：郜茜 作者单位：青海大学附属医院消化科 　　【关键词】 基因功能 　　Klotho(Kl)基因是由Kuro-o等[1]在1997年研究自发性高血压时偶然发现的，后确认Klotho基因缺失鼠(Kl-/-)的表型类似人类的衰老表现，包括寿命缩短、动脉硬化、皮肤肌肉萎缩、认知障碍、运动神经元受损、软组织钙化、听力下降、骨质疏松[2～4]。反之，Klotho基因高表达可延长实验动物的寿命[2]，说明它是一个衰老抑制基因。当Kl表达异常时，出现一系列与衰老及与衰老密切相关的疾病[5]，提示Klotho基因在衰老和衰老相关疾病的发生中起着重要作用。同时在一些病理状态下，Kl表达变化也和疾病的发展、预后密切相关。近年研究发现，Kl抗衰老的作用主要是通过抗氧化、抗凋亡功能实现的，本文就这方面研究作一综述。 　　1 Kl的一般生物学特点 　　Kl基因1997年由Kuro-o等[1]首先从表现为衰老的模型小鼠中克隆成功，随后发现人和大鼠中也存在Kl基因，且它们之间具有较高的同源性(83%)。Kl基因在人和小鼠中均定位于第13号染色体(13q12)，基因全长50 kb，包含5个外显子，可通过选择性拼接产生两种蛋白产物上，一种为膜型Kl蛋白，人的膜型Kl蛋白全长有1012个氨基酸残基(小鼠为1024个)，为跨膜蛋白，该类型主要在肾脏、胎盘、小肠和前列腺中表达;另一种为分泌型Kl蛋白，人的分泌型Kl蛋白全长有549个氨基酸残基(小鼠为550个)，该类型缺乏跨膜结构和胞内结构，它以游离的形式发挥功能，在人的大脑、海马、胎盘、肾脏、前列腺和小肠等组织中均检测到其存在，在血清中也检测到Kl蛋白的存在[6]。目前认为血循环中的Kl蛋白作为一种激素参与对机体功能的调节，它可与细胞表面的受体结合，抑制细胞内胰岛素和胰岛素样生长因子-1(insulin/IGF)的信号转导通路，对多种靶器官发挥生理效应[7]。 　　2 Kl基因的抗氧化作用及抗凋亡作用 　　活性氧簇(Reactive oxygen species，ROS)在缺血、中毒、免疫等因素介导的组织损伤中的作用日益引起人们的重视，氧化应激是缺血再灌注引起急性肾损伤的一个重要原因[8]。动物实验和体外实验都证实了ROS在组织损伤中的作用，并把清除氧自由基作为治疗的重要方法之一。有研究表明动物在应激状态下体内Kl mRNA和蛋白表达下降。Mitobe等[9]对小鼠肾脏内髓集合管3细胞(Mouse inner medullary collecting duct 3 ，mIMCD 3)进行培养观察发现，在过氧化氢(H2O2)诱导的氧化应激状态下Kl表达降低，凋亡细胞数目增加，并且这种改变和剂量、时间的变化呈正相关，可将其作为氧化应激状态下组织细胞凋亡的一个指标[10]。Haruna,Y[11]等发现肾小球肾炎的小鼠动物模型在40周时肾组织凋亡细胞数较转Kl基因小鼠(ICGN/KlTG)增多明显，并伴有抗凋亡蛋白Bcl-2的下调及凋亡蛋白Bax的上调。Yamamoto等[12]观察了Kl高表达转基因小鼠(EFmKL48)和野生型小鼠尿中8-OhdG(活体内DNA氧化损伤的生物标记)的分泌量发现，EFmKL48鼠尿中8-OhdG分泌量仅为野生型小鼠的一半，提示Kl的高表达能降低体内DNA的氧化损伤;在服用致死剂量的百草枯(除草剂，可产生过氧化物)后EFmKL48鼠的寿命长于野生型小鼠;在培养HeLa细胞的培养基中加入百草枯，处理组中加入可溶性的Kl蛋白，观察细胞脂质氧化。和对照组比较，处理组脂质过氧化情况较对照组明显减轻;在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞培养基中加入百草枯，处理组中加入可溶性Kl蛋白，发现和对照组相比处理组中细胞凋亡数目明显降低，以上实验均提示Kl具有抗氧化、抗应激、抗凋亡的作用，并认为其机理可能为Kl蛋白和细胞表面的Kl受体结合抑制特异性转录因子FOXO的磷酸化，加速了FOXO的核转位，细胞核的FOXO直接和超氧化物歧化酶2(SOD2)启动子相结合使SOD2表达增加，有利于对过氧化物的清除。但Ikushima等[13]发现Kl也可抑制由依托泊苷诱导的凋亡反应，依托泊苷是一种拓扑异构酶Ⅱ的抑制剂，其诱导的凋亡和氧化应激有一定的关系，说明Kl抑制凋亡可能还可通过另一条通路进行，即insulin/IGF- MnSOD通路，通路激活二氧化锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的活性减轻氧化应激诱导的凋亡反应[12]。Ikushima等[13]用20 nM浓度的Klotho蛋白处理人脐静脉上皮细胞(HUVEC)后，和对照组比较，caspase3和caspase9的活性明显降低，但细胞活性升高明显，提示Kl还可能通过抑制caspase9