HPV16L1和共刺激分子B7-2裸DNA共免疫小鼠后细胞免疫反应原位观察.pdfVIP

第2 5 卷第3 期 西 安 交 通 大 学 学 报 （医 学 版 ） ol 25 o 3 2 0 0 4 年6 月 Journal of Xian Jiaotong University（Medical Sciences ） Jun 2004 研究简报 HPV16 L1 与共刺激分子B7-2 裸DNA 共免疫小鼠后 细胞免疫反应原位观察 蒋小英，王一理，司履生 （西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室，陕西西安 7 10061） 摘要：目的 原位研究PRC/ CMV L1 与B7-2 裸 DNA 经肌肉免疫小鼠后的细胞免疫反应，尤其是细胞毒性T 细胞 （CTL ）反应。方法 ①取雌性C57BL/ 6 小鼠15 只，随机分为3 组：PRC/ CMV L1 质粒免疫组、PRC/ CMV L1 质粒和 PLXHD. mB7-2 质粒共免疫组；同时设空质粒对照，经小鼠股四头肌肌内注射，共免疫3 次，每次间隔3 周。 免疫9 ② 周后取脾脏，中性福尔马林固定、石蜡包埋，常规切片，以地高辛标记的IFN-γ 及Perforin 寡核苷酸为探针，原位杂交 技术检测试验小鼠脾脏的IFN-γ 及Perforin 阳性细胞。结果 PRC/ CMV L1 质粒免疫组可见脾脏增大，淋巴小结增 多， T 细胞区及淋巴滤泡明显活化；与PLXHD. mB7-2 质粒共免疫组变化更为明显；PLXHD. mB7-2 质粒共免疫组IFN- γ 和Perforin 阳性细胞较PRC/ CMV L1 单独免疫组为多。结论 PRC/ CMV L1 裸DNA 疫苗免疫可诱发明显的细胞免 PLXHD. mB7-2 质粒共免疫可提高细胞免疫水平。 疫反应， 关键词： cDNA 免疫；细胞免疫；HPV16 中图分类号：R392 . 3 文献标识码：A 文章编号：167 1-8259（2004 ）03-0310-02 宫颈癌是世界范围内女性的第二大恶性肿瘤，严重威胁 Perforin 5 -TAA AGT TGT ACT GGT CCT GAT AGG TCT-3 ； 着妇女的身体健康［1］。近年来研究表明高危性人乳头瘤病毒 IFN-γ 5 -GAC TTC AAA GAG TCT GAG GTA GAA AGA-3 。 16 型（HPV16 ）感染是宫颈癌的主要启动因子，由于人乳头瘤 1. 2 实验动物和免疫 6 ～ 8 周龄、雌性 C57BL/ 6 小鼠15 病毒不能在体外培养且缺乏敏感动物，很难获得足够的病毒 只，购自陕西省中研院动物实验中心，随机分为3 组： 空质 ① 颗粒制备疫苗［2 ］。近年来大量实验表明，DNA 疫苗作为一种 粒PRC/ CMV 作阴性对照； PRC/ CMV L1 质粒免疫组； ② 新的免疫手段，可有效诱发机体的细胞免疫和体液免疫反 ③PRC/ CMV L1 + PLXHD. mB7-2 共免疫组。 ［3 ］ 应 ，我室也成功构建了HPV16 L1 真核表达质粒PRC/ CMV 免疫前3 d ，小鼠双侧骨四头肌注射2 g ·L - 1 盐酸布比卡 L1，并证实可在体外表达L1 蛋白，免疫动物可诱发特异性抗 因 - 1 100 µL ·侧 ，以提高质粒DNA 的摄取效率。每侧股四头 体。本研究旨在明确PRC/ CM