DNA甲基化方法的研究现状.pdfVIP

●技术与方法 《生命的化学》2003 年 23 卷 2 期 1·49 · ( ) CHEMISTRY OF LIFE 2003 , 23 2 ( ) 文章编号 2003 　　 DNA 甲基化方法研究现状 沈佳尧 　侯 　鹏 　祭美菊 　李 　松 　陆祖宏 　何农跃 ( 东南大学生物医学与科学工程系吴建雄实验室 , 南京 210096) 摘要 :DNA 的异常甲基化与肿瘤的发生发展密切相关。DNA 甲基化已成为研究热点,有关研究方法发展迅速。甲基 化研究方法大抵分为两大类 :1. 基因组 DNA 的甲基化检测;2. 特定 DNA 片段的甲基化检测。目前的研究重点已转 移到特定基因尤其是抑癌基因的甲基化。 关键词 : 甲基化;抑癌基因 ;微阵列技术 中图分类号:Q75 　　在肿瘤发生发展过程中 ,基因功能的改变包括 因组DNA 甲基化水平下降的程度。这种方法较为 ( ) [1 ] 基因机制和后生机制 epigenetic mechanism 。 简便 ,但精确度不高。 DNA 甲基化是目前已知脊椎动物唯一的后生改变。 ( ) 1. 3 　高效液相色谱 HPLC 法 　　将 DNA 用酸或 人类基因组中约 4500 个 Cp G 岛存在异常甲基化 ,其 酶裂解为碱基 ,通过色谱柱分离出各种碱基 , 由波长 中很多 Cp G 位点的异常甲基化与癌症的发生发展 260nm 的紫外光测定其吸收峰并定量 ,灵敏度为碱 密切相关[1 ] 。因此 ,DNA 甲基化已成为目前的研究 基[4 ] 。由积分面积5mC/ (5mC + C) 的百分数检测基 热点。近年来甲基化分析方法发展迅速 ,大致可以 因组 DNA 中 5mC 的含量 , 即 DNA 甲基化的水平。 分为两大类 :基因组 DNA 及特定 DNA 片段的甲基 此法是目前测定基因组 DNA 中 5mC 总量最标准的 化检测。 方法。 1. 基因组 DNA 的甲基化检测 2. 特定 DNA 片段的甲基化检测 肿瘤组织中癌基因异常表达 ,基因组 DNA 的甲 近年来人们发现在癌变组织中抑癌基因低表达 基化程度一般较相应的正常组织低。检测方法主要 甚至不表达 , 甲基化程度比正常组织明显增高[5 ] 。 有以下三种。这些方法只能检测基因组 DNA 的甲 DNA 甲基化异常不仅能促进染色体缺失、重排和突 基化 ,并不能具体到特定的基因和位点。 变 ,还可直接灭活抑癌基因。典型的抑癌基因 p 16 、 1. 1 　限制性内切酶酶解法 　　采用不能切割含 Rb 和 VHL 等 Cp G 位点甲基化普遍存在于多种缺乏 ( ) 5mCp G 片段 5mC 为 5 甲基胞嘧啶 的甲基化敏感的 突变和丢失的肿瘤中 ,因而DNA 异常甲基化可能是 限制性内切酶分别消化处理肿瘤和正常组织DNA , 肿瘤中抑癌基因失活的重要机制[6 ] 。 经琼脂糖凝胶电泳检测 ,正常组织