D—泛解酸内酯水解酶产生菌的筛选与产酶条件研究.pdfVIP

维普资讯 42卷 I期 微 生 物 学 报 VoI．42 No．1 2002年 2月 AefaMieroMotogieaSiniea February 20O2 D．泛解酸内酯水解酶产生菌的筛选及产酶条件研究 汤一新 孙志浩 华 蕾 过鑫富 汪 军 (，江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室 无锝 214036) (浙江鑫富生化股份有限公司 杭州 3113O1) 摘 要 ：筛选到一株产 D．泛解酸内酯水解酶的菌株 ，经鉴定为 串珠镶孢霉菌(Fusaru／mmon~／一 forme)SW-902。产酶条件研究表明，用甘油作碳源，蛋白胨作氨源，初始 pH8．0，温度 26qC，摇 瓶培养 3d，产酶量最高。在60L发酵罐 中通风发酵 45h，产菌丝体生物量 7．18g干菌体儿，D_ 泛解酸 内酯水解酶酶活力达到 0．921U／g干菌捧 。 美攮词 ：D-泛解酸 内酯水解酶 ，串珠镰孢霉菌 SW-902．D-泛酸 中圈分类号：0556 文献标识码 ：A 文章编号：0001—6209f2002101-0081-07 D．泛酸钙 (右旋泛酸钙)，为维生素类药物 ，广泛应用于医药 、食品、饲料工业。泛酸作 为食品和饲料添加剂的需求量很大。 目前世界 泛酸钙年产量 6，000—7，000t，年需求量 8．000～10，000t，产品供不应求 。随着食品和饲料工业的发展 ，需要大规模增加 D-泛酸 钙的生产能力和产量 其 中的主要技术难题是泛解酸内酯的手性拆分技术。 生产泛酸的传统方法是采用 Stiller法 (异丁醛．甲醛-氰化钠法)或者 乙醛酸一异丁醛法 合成泛解酸内酯 ，再将B．丙氨酸钙与泛解酸内酯直接缩合即得到 DL一泛酸钙 “。DL-泛 酸钙的拆分大都是采用化学法 ，用手性拆分剂 (氰霉胺等)拆分或者诱导结晶法拆分等，化 学法拆分存在着环境污染严重的问题 。国内采用诱导结晶法 ，工艺已经相 当成熟，但是该 方法 只可 以生产泛酸钙 ，无法用于其他泛酸衍生物如 D．泛醇、D一泛酰巯基 乙胺等 的生 产 。1994年 日本 SakamotoKeiii等人报道 了用微生物酶法拆分泛酸钙合成中间体泛解 酸内酯的方法 -，用微生物酶将 DL-泛解酸 内酯拆分得到 D．泛解酸 内酯 ，再与 丙氨酸 钙缩合生产 D．泛酸钙 ，认为该方法工艺简单 ，成本低，从环境角度考虑也有利 。 目前已报道能够生产泛解酸内酯水解酶的菌株主要有镰孢霉菌(Fusar／um)，赤霉菌 (C,ibberella)，粘帚霉 (C,liocladhtm)，黑曲属 (AspergiEus)，以及 Cylindrocarpon，Volutella等…。 我们从实验室保藏和收集的有关霉菌菌株中，筛选到一株具有 D-泛解酸内酯水解活性的 镰孢霉菌(Fus。ri“m sp．)，通过进一步分离、纯化 、诱变 、鉴定，得到一株 串珠镰孢霉菌 (Fman；ummort／／帕 e)SW．902(CGMCCNo．0536) ，并且对该菌株进行 了产酶条件和酶法 拆分泛解酸 内酯的研究。 国家十五科技攻关项 目部分 内容(2OOlBAT08B5) 通信联系人 作者俺介：汤一新(1977一)，女，江苏无镭人，1999届硬士研究生。 收■ 13期 ：2001．05．11． 回 13期 ：2001．07．18 维普资讯 微 生 物 学 报 42卷 1 材料和方法 1．1 菌种来源 镰孢霉菌( m m 印．)SW．9，从实验室保藏和收集的有关霉菌菌株中筛选。 1．2 培养基 1．2．1 斜面培养基 ：20％马铃薯浸汁900mL，葡萄糖 20g，琼脂 20g，pH 自然 ，定容至 lL。 1．2．2 种子培养基 ：甘油 log，蛋白胨 10g，酵母膏 log，玉米浆 10g，pH6．O．定容至 1L。 1．2．3