化疗药环磷酰胺对癌细胞的细胞周期影响与诱导凋亡作用的研究.pdfVIP

化疗药环磷酰胺对癌细胞的细胞周期影响和诱导凋亡作用的研究 刘东玉 孔晶 刘国玲 刘凤仪 高春燕 1 卫生部中日友好医院临床研究所 北京100029 摘要 目的 研究化疗药环磷酰胺对癌细胞周期 DI 值 PI 值等某些生物学特性的影响及 其诱导癌细胞凋亡的作用 方法 用BALB/c 小鼠 荷腹水性肝癌 经腹腔给药CTX 后 抽取腹水癌细胞进行形态学观察和流式细胞光度分析研究 结果 在环磷酰胺的作用下 癌 细胞发生了凋亡 形态上观察到了许多凋亡细胞和凋亡小体 流式细胞光度分析发现 药物 作用后 细胞周期发生了巨大变化 大多数癌细胞被阻断在 G2M 期 而 GI 期癌细胞明显 减少 p0.05 p0.01 同时 给药组癌细胞的 DNA 值和 PI 值亦明显增高 p0.05 p0.01 结论 环磷酰胺能够诱导癌细胞凋亡 而且对癌细胞的细胞周期一般规律有较大 的干扰 分析认为这对癌症临床治疗会有一定启示 关键词 环磷酰胺 癌细胞凋亡 细胞周期 众所周知 癌症是威胁人类健康与生命的大敌 全世界每年约有700 万新患癌症的病人 中国也有约160 万新患癌症 因此 癌症的治疗面临的任务十分艰巨 目前 现有的治疗方 法已远远满足不了癌症治疗的需要 故此 寻找新的抗癌治疗方法也是当前的重要课题之一 1 化疗药物应用已在某些临床病例见到了很好的疗效 然而 文献上报道的并不完全一 2 致 那么 化疗药物联合起来对癌细胞的作用究竟如何 我们首先设计用环磷酰胺 CTX 观察它作用于癌细胞后 对癌细胞的细胞周期 DNA 含量等的影响 并观察其是否有诱导 癌细胞调亡的作用 本文就是这一研究的初步果 材料与方法 1 荷瘤动物模型 BALB/c 纯系小鼠 雄性 18 22 克 每批实验需用30 只小鼠 小鼠腹腔传代的小鼠 肝癌细胞 H22 当腹水生长到 7 10 天时 在无菌条件下抽取腹水 癌细胞经过计数 7 然后将细胞数量稀释调整到1 10 /ml 然后 给每只实验小鼠腹腔注射0.02ml 上述细胞悬 液 约在7~10 天开始生长出腹水 随即分组给药 并进行一系列的观察与分析研究 2 实验分组与给药 1 对照组 10 只小鼠 不给药 为对照组 2 实验组 环磷酰胺组 剂量为10mg/ml 100mg/kg 0.2ml/只 每天一次 从第8 天到10 天 腹腔注射 连续3 天 3 观察项目与指标 1 形态学观察 主要观察细胞有无损伤与破坏 有无核及染色质的固缩 分 化情况及细胞分裂活动 有无凋亡及凋亡小体等出现 2 流式细胞光度计分析 分析细胞的DNA 含量 组方图 DNA 指数 DI 值 增殖指数 PI 值 并注意有无凋亡峰出现和细胞周期的变化等 2.3 结果 1 形态学观察结果 形态观察可见对照组癌细胞为典型的恶性细胞特征 形状不规则 大小差异较大 胞体 较正常细胞明显大 核分裂现象多见 表明癌细胞增殖分裂活跃 各组癌细胞未见明显的损 1 伤与破坏 亦不见染色质及核固缩现象 给药组也几乎见不到核分裂现象 表明药物抑制了 癌细胞的增殖分裂活动 在给环磷酰胺 CTX 组见到了典型的凋亡变化和凋亡小体 见附 图 2 流氏细胞光度计分析结果 结果令人感兴趣 在给环磷酰胺组 G1 期的癌细胞明显减少 p0.05 而G2M 期的癌 细胞明显增加 p0.05 表明在药物的作用下 使大部分的癌细胞阻断在S 期和G2M 期 见 表 1 进一步分析发现 环磷酰胺组的癌细胞DNA 指数没有发生变化 增殖指数明显增高 p0.01 见表2 表2 环磷酰胺对癌细胞倍体和增殖指数的影响 讨论 根据癌细胞生物学规律 细胞的增殖分裂活动DNA 含量倍体数/细胞周期/分化程度/抗 原性以及癌基因表达程度都从不同侧面代表着癌细胞的恶性程度 这些特性的变化就意味着