DHPLC在X_连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中应用_附12例报告_.pdfVIP

　解放军医学杂志 2008 年 3 月 第 33 卷 第 3 期 Med J Chin PL A Vol 33 No 3 March 2008 　 ·299 · D HPLC 在 X连锁肾上腺脑白质 营养不良分子诊断中的应用( 附12 例报告) 柯龙凤　王志红　黄梁浒　严爱贞　杨渤生　朱忠勇　兰风华 ( ) 【摘要】　目的　探讨D HPLC 在 X连锁肾上腺脑白质营养不良 XALD 分子诊断中的应用 。方法 　提取 12 个 XALD 家系及 成员的外周血基因组DNA ,分 15 个片段扩增 ABCD1 基因的 10 个外显子 ,应用 D HPLC 技术对其进行突变筛查 ,并对出现异常洗脱 峰的PCR 产物进行DNA 序列测定 ,证实突变位点的存在 。结果　12 个 XALD 家系存在 12 种不同的ABCD1 基因突变 ,包括 8 个错 义突变、2 个移码突变和 2 个无义突变 ,即 P534R 、G343V 、R259W 、A141T 、R401Q 、K276E 、Y174C 、A314P 、f s E471 、f s A247 、S108X 和 Q177X 。结论　D HPLC 筛查结合DNA 序列测定能快速有效检测出ABCD1 基因突变 。不同的XALD 家系有不同的ABCD1 基因突 变位点,突变类型和表型之间无特殊相关关系。 　　【关键词】　肾上腺脑白质营养不良;DHPLC ;ABCD1 基因;分子诊断技术 　　【中国图书资料分类号】　R5962 Application of D HPLC in molecular diagnosis of Xlinked adrenoleukodystrophy ( report of 12 cases) Ke Longfeng , Wang Zhihong , Huang Lianghu , et al Center for Molecular Diagno sis of Genetic Diseases , Fuzhou General Ho spital of Nanjing Command , Fuzhou 350025 , China 【Abstract 】　Objective 　To investigate the feasibility of utilizing denaturing high performance liquid chromatography (D HPLC) in mo lecular diagnosis of Xlinked adrenoleukodystrophy Methods 　The genomic DNA was extracted from peripheral blood of 12 Chinese pa tient s with Xlinked adrenoleukodystrophy and their family members (including 11 cases of Xlinked adrenoleukodystrophy and 26 cases ) with Xlinked adrenoleukodystrophy indices Two methods , DHPL C and DNA direct sequencing , were used to analyze the ABCD1 gene from the genomic DNA D HPLC was utilized to screen the gene mutations after amplifying the 15 fragment s of the 10 exons and exonin tron boundaries of the ABCD1 gene For confirming the mutations , tho se PCR product s , in which