一个承载分子的设计和肽抗生素hPAB2β的高效表达.pdfVIP

第 24 卷第 4 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 24 , No. 4 　　　　 　　　　 2002 年 4 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Apr. 2002 389 ( ) 文章编号 2002 论著 β 一个承载分子的设计与肽抗生素 hPAB 的高效表达 ( 饶贤才 ,金晓琳 ,胡晓梅 ,朱军民 , 陈自瑾 ,胡福泉 　　第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程重点 实验室 ,重庆 400038) β β 　　提 　要 : 目的 　通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素 hPAB ,为大量制备 hPAB 奠定基础。方法 　根据肽抗生素的 特性 ,确立 4 条设计原则 ,并据此设计一 489bp 的承载蛋白编码序列 ,用化学合成法获得该序列并将之克隆到 pQE32 中构建成表达 β 载体 ,进一步将肽抗生素 hPAB 基因插入上述表达载体 ,肽抗生素基因位于承载蛋白编码序列 3 ’端 ,两者构成融合基因。将含融 合基因的表达载体转化大肠杆菌JM109 ,筛选阳性重组子 ,并用阳性重组子表达融合蛋白。结果 　设计的承载蛋白为 163 个氨基 β 酸 ,分子量 17668. 80 , 等电点 5. 621 。用承载分子与肽抗生素 hPAB 构建的融合蛋白表达载体转化细菌后 ,筛选到 4 个阳性重组 子 ,均能高效表达肽抗生素融合蛋白 ,融合蛋白的产量占细菌总蛋白的 40 %～45 % 。结论 　设计的承载蛋白分子能够实现肽抗生 素的高效表达。 　　关键词 : 承载蛋白 ;肽抗生素 ;高效表达 　　中图法分类号: R39233 ;R394. 3 ;R978. 1 　　 文献标识码 : A β Design of a carrier molecule and high level expression of peptide antibiotics hPAB RAO Xiancai , J IN Xiaoling , HU Xiaomei , ZHU Junming , CHEN Zijin ,HU Fuquan (Department of Microbiology , Third Military Medical University , Chongqing 400038 ,China) β 　　Abstract : Objective 　To design a carrier protein molecule which can express peptide antibiotics hPAB at high level. Methods 　Accordin