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美洲大蠊若虫变应原的基因克隆及序列测定.pdf

·32 · Journal of Tropical Medicine Vol. 2 No. 1 Mar. ,2002 美洲大蠊若虫变应原的基因克隆及序列测定 1 1 2 3 2 刘志刚  黄炯烈  周珍文  李金生  杨 慧 ( ) 1 中山大学中山医学院寄生虫学教研室 广州 510089 ( ) 2 江西医学院医学免疫学教研室 南昌 330006 ( ) 3 江西医学院生物化学与分子生物学教研室 南昌 330006 【摘要】 目的  对美洲大蠊若虫 cDNA 表达文库进行免疫学筛选 ,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应 原克隆 ,并测定其基因序列 ,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据。方法  选用对 ( ) 美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者 如哮喘、过敏性鼻炎 阳性血清 ,对美洲大蠊若虫 cDNA 文库进行免疫学 筛选。使用按照重组载体入 ExCell Not I/ EcoRI/ CIP 臂插入位点邻近区域的上、下游碱基序列设计的引物 ,扩增阳 4 性噬菌斑中插入的 cDNA 片段。并对 cDNA 插入片段进行序列测定。结果  经用阳性血清对 2 3 ×10 噬菌体斑 的免疫学筛选 ,获得了 5 个阳性克隆 ,PCR 直接序列分析表明这 5 个阳性克隆均为美洲大蠊若虫变应原未知基因 克隆。结论  该研究发现了美洲大蠊若虫变应原新基因 ,为进一步开展美洲大蠊若虫特异性重组变应原的研究奠 定了基础。 【关键词】 美洲大蠊若虫 ; 重组变应原 ; cDNA 文库 ; 免疫学筛选 ; 序列分析 + ( ) 中图分类号:R392. 8 ;Q523 8    文献标识码 :A    文章编号 :0254 - 900X 2002 01 - 0032 - 04 Identif ication and isolation of the cD NA clones encoding the allergens of Peri planeta american nymph Liu Zhigang1 , Huang Jionglie1 , Zhou Zhenwen2 , Li Jinsheng3 , Yang Hui2 1. Dept . of Im m unology , S un YatSen U

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