β-葡萄糖苷酶高产菌株筛选.pdfVIP

南昌高专学报2007年第4期(总第7l期)2007年8月出版 如Ⅱmaf矿№^∞gcoffe伊ⅣD．4岱“m71) A“昏2007 13一葡萄漉苷磕高产菌株筛选 张 芳 阙生全 黎定标 (南昌理工学院生物环境与工程系，江西南昌330013) 摘 要：以黑曲霉为出发菌株。经紫外线一氯化锂诱变得13株长势良好的单菌落。通过水解水杨苷产还原 糖方法测定这13株茵固态发酵产B一葡萄糖苷酶活力，结果表明，IK一7产酶活最高，可这118．95u／mL，比原 始茵株提高了将近6倍。 关键词：黑曲霉；B一葡萄糖苷酶，诱变 中图分类号：Q556+．2 文献标识码：A 1．2．3制霉素抗性培养基 B一葡萄糖苷酶(EC3，2，1，21)，其英文名是： beta glucosidase，属于水解酶类，是一种可由黑曲 霉菌分泌的胞外酶，工业上应用广泛。细胞表面 结构的通透性。是细胞与环境进行物质交换的屏 脂，在查氏培养基的基础上，加入KCl至0．15％ 障。细胞借助于这种通透性实现的代谢控制方式 是整个代谢系统中重要的一环。如果细胞膜通透 性很强，则细胞内代谢物质容易往外分泌，反之， 50～60℃的水浴锅内，恒温，向其中加入不同浓度 细胞内代谢物难以分泌至胞外，使胞内终产物浓 的制霉素。 度大量增加而引起反馈调节。影响终产物的积 1．2．4产酶培养基 累。制霉菌素是一种大环内脂类抗真菌剂，能与 真菌细胞膜中麦角固醇结合。引起细胞膜的损 三角瓶中。12l℃灭菌20Illin。 伤。据此推测，制霉素抗性突变株有可能发生细 1．3试剂 胞膜透性的改变。从而增加菌体对营养物质的吸 制霉素(50万单位，片)，购于浙江震元制药 收，有利于胞内合成的B一葡萄糖苷酶向胞外的 厂；KCl，购于天津化工厂；水杨苷，购于中国药 分泌．因此运用制霉菌素来筛选高渗透性变异株 品生物制品检定所；其它试剂均为分析纯。 有可能得到B一葡萄糖苷酶高产菌。 DNS试剂的配制【4】：准确称取酒石酸钾钠 1．材料 1．1菌株 黑曲霉。 蒸馏水中，标记为B试液。准确称取3，5一二硝 1．2培养基 基水杨酸10．Og完全溶于B试液中，标记为C试 1．2．1斜面培养基 液。将C试液和A试液混合用蒸馏水定容至 马铃薯2009，蔗糖209，琼脂159，水 放置7天后。用细纱布过滤蔽光保存。 1000mL，pH自然。马铃薯去皮，切成块煮沸 O．1M 30min。然后用纱布过滤。再加蔗糖及琼脂，溶化 pH=4．8醋酸一醋酸钠缓冲液的配制：溶 后补水至1000mL。121℃灭菌20min。 1．2．2查氏培养基 0．1M醋酸溶液。溶液B：称取8．29醋酸钠，溶解 O．3％NaN03，0．05％KCL，0．001％FeS04，0．1％后容至1‰L，制成0．1M醋酸钠溶液。使用是 以A：B=4：6的比例混合。低温冷藏备用。 K2HP04，O．05％M$04·7H20，2％蔗j睹，2％琼 脂，pH6．7，121℃灭菌20IIlin。 1．4主要仪器 收稿日期：2007一04—30 作者筒介：张芳(1981一)。女．山西晋城人，讲师，硕士，主要研究方向：微生物催化。 万方数据 2