肿瘤细胞原代培养及药敏(MTT法)的质量控制.pdfVIP

安 徽 医 药 Anhui_MedicalandPharmaceuticalJournal2009Jan；13(1) ．23． 肿瘤细胞原代培养及药敏 (MTT法)的质量控制 徐文科 ，乔小云 (1．安徽省皖南医学院弋矾山医院，安徽芜湖 241001；2．江苏省南京市鼓楼医院，江苏 南京 210008) 摘要：目的 考察肿瘤细胞原代培养及药敏 (M1T法)各项操 1．4 培养时间的确定 一般要求在 37℃、5％CO 培养箱中 作规程，为质量控制提供实践依据。方法 在操作过程中，注 培养48～72h，在整个过程中，不能断电、断气，否则效果受影 意强化无菌操作 、规范化取舍标本 、显微镜下控制单细胞悬液 响。如果培养24～36h后，培养液的颜色已经变黄，即可以 浓度、培养和测定条件的控制、工作液稳定性的研究。结果 进行下一步的操作而不需继续培养，缩短出报告的时间，降低 肿瘤细胞原代培养及药敏 (MTI法)的结果稳定性有 了很大 成本。 的提高。结论 通过严格控制实验操作程序，肿瘤药敏 M．rr 1．5 甲腰结晶的溶解 现有的操作程序要求在标本中加入 法的临床相符性令人满意 ，可在实际工作中推广。 10％十二磺基硫酸钠 (SDS)后 ，震荡30rain，再置于室温30～ 关键词：肿瘤细胞 ；培养；药敏；质量控制 120min，待结晶完全溶解后测定。我们的工作体会是 ，震荡 30rain后，置于37oC、5％CO：培养箱中继续培养 1h，能达到 肿瘤细胞培养和药敏实验是筛选抗肿瘤药物的主要研究 完全溶解甲躜结晶的目的，并且测定结果相当稳定。 方法 。不合适的临床抗肿瘤化疗药物不仅使治疗失败， 2 根据工作需要 ，探讨相关研究 同时能诱导肿瘤细胞产生耐药性。因此，对提高临床疗效、减 2．1 抗肿瘤药物浓度的探讨 相关的文献报道有采用人体 轻毒副作用也具有重要的意义 。目前国内的医疗机构中， 药物峰浓度、2倍 峰浓度和 5倍 峰浓度甚至 l0倍浓度 对肿瘤组织进行细胞培养及药敏实验大多采用体外四氮唑盐 等 ’ 。由于体内体外环境的差异 ，如果低浓度在体外有良 (MTF)法，具有操作简便 、成本低廉 、耗时少 、无放射性等优 好的抑制作用 ，采取 1／2倍峰浓度是否可行有待于在以后的 点 “。该法主要的缺陷是 ，结果不稳定导致与临床相符性 工作中继续探索 、验证。特别是对昂贵的部分药物来说 ，降低 差。究其原因，因为在整个操作过程中，需要严格质量控制的 成本对医院、对病人均有重要的经济意义。 步骤较多，各种操作过程需要多次试验来验证 。我们在 2．2 工作液的冻融稳定性研究 含抗互素的生理盐水、MTT 实际工作中，通过流程质量控制，获得了比较满意的结果。现 液均不稳定，需现配现用。由于所需 的浓度均很低 (青霉素 报道如下。 100～200IU ·ml 链霉素 100～200IU ·ml～、Mrr2 5 1 操作规范化 g·L )。为了防止浪费，整个配制过程中耗时较长。可以 1．1 强化无菌操作 在细胞培养及药敏实验时，需要配制 一 次配制合适的量并冷冻 (一20oC)保存 ，需要时再室温解 1640培养液 、工作浓度的试剂和抗肿瘤药物、含有抗生素的 冻。抗肿瘤药物由于品种多，相对浓度不一，临时配制困难 生理盐水等。这些药液的配制要求必须在净化的空间中配 多。预先储备，大多数药物的稳定性又差，在2—8oC范围内 制，以免有细菌的污染。参与配制的玻璃瓶、培养皿 、不锈钢 推荐保存24h。短期的冷冻储存不影响药物的抑制活性。如 细胞滤筛 、试管、移液管、吸头等器械均需在清洗后 121℃、30 果～次配制多量后冷冻储存，随着解冻次数的增加，药物对肿 rain水