TaqMan-LNA探针荧光定量PCR快速检测对虾传染性皮下与造血组织坏死病毒.pdfVIP

南方农业学报 2011，42(12)：1545～1549 JournalofSouthern Agriculture http：／／www．nfnyxb．com TaqMan—LNA探针荧光定量PCR快速检测对虾 传染性皮下及造血组织坏死病毒 韦信贤，一，童桂香 ，谢宗升 ，吴祥庆 ，黄国秋 ·，黄玉柳 ，廖永志 ，黎小正 (广西渔业病害防治环境监测和质量检验中心，南宁 530021； 上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306) 摘要：【目的】建立快速、特异、灵敏检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的TaqMan—LNA探针荧光 定量PCR方法，为IHHNV的临床诊断和疫情监测提供更简便的检测技术。【方法】根据GenBank已发表的IHHNV毒株序 列，在IHHNV保守区序列设计特异性引物和TaqMan—LNA探针；对荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间， 提高特异性和灵敏度；应用TaqMan—LNA探针荧光定量PCR对广西地区的300份凡纳滨对虾样品进行检测 ，验证方法 的实用性。【结果 】TaqMan—LNA探针荧光定量PCR检~j[lHHNV的灵敏度高，约为10个病毒粒子，反应 ，定量范围宽，在 1．6x10 1．6×l0s拷贝／L的范围内具良好的线性关系；与SPF凡纳滨对虾组织、WSSV、副溶血弧菌的DNA和rI1sv的RNA 均无反应，特异性好；组内变异系数为0．53％一1．75％，组间变异系数为0．81％～1．14％，重复性和重现性均较好 ，结果稳 定可靠；临床应用结果表明，300份凡纳滨对虾样品检出193份阳性，阳性率为64．3％，表明广西沿海地区养殖的凡纳滨 对虾IHHNV感染率较高。【结论】利用TaqMan—LNA探针建立检~JtIHHNV的荧光定量PCR方法具有快速、特异、灵敏、重 复性好、能定量等优点，可用于对虾IHHNV的检测。 关键词：凡纳滨对虾 ；传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)；TaqMan—LNA探针；荧光定量PCR 中图分类号：$945．4 文献标志码：A 文章编号：2095—1191(2011)12—1545—05 Rapiddetectionofinfectioushypodermalandhematopoietic necrosisvirusinshrimpsusingTaqMan-LNA probe real-timePCR WEIXin—xian，一，TONGGui—xiang ，XIEZong-sheng ，WUXiang-qing ， HUANGGuo—qiu ，HUANGYu-liu ，LIAOYong-zhi，LIXiao-zheng (FisheriesDiseasePreventionEnvironmentalMonitoringandQualityTestingCenterofGuangxi，Nanning530021，China； CollegeofFisheriesandLifeScience，ShanghaiOceanUniversity，Shanghai201306，China) Abstract：【Objective】ThepresentexperimentwasconductedtodevelopaTaqMan-LNAprobereal-timePCRassay fordetectionofinfeetioushypodermalandhematopoieticnecrosesvirusfIHHNV)toprovideconvenientdetectiontechnology ofrclinicaldiagnosisandepidemicmonitoringofIHHNV．【Method】rI1IlespecificprimersandTaqMan-LNA probes w