分子鉴定20059种检疫性实蝇PCR—RFLP快速鉴定的研究.pdfVIP

维普资讯 2005年第J期 植物检疫 PLANTQu^R^唧 9种检疫性实蝇PCR—RFLP 快速鉴定研究 吴佳教 胡学难 赵菊鹏 梁 帆 梁广勤 (广州出入境检验检疫局 510623) Sa#didentificationamong9speciesofquarantinefruitflies(Diptera：Tephritidae)by腿 RFLP．WuJiajiao，HuXuenanZhaoJupentg，LiangFan，“angG|l舢I8qin，(GuangzhouEntry-ExitInspec— tionandQuarantineBureau，GunE~ ou，510623) A 缸囊ct rI1lemethodofrapididentificationamong9speciesofquarantinefruitfliesinterceptedfre— quenflywasconductedbasedonPCR-RFLPoftllemitochondrialDNA(mtDNA)．rI1leresultsshowedthat DNAs，about350bpand450bprespectively，wereamplifiedbyn啪 sofPCRwithtwopairsofprimers designedfrommtDNAoftargetpests．rI1lePCR-productscouldbedigestedbyrestrictionEnzymes(MSEI andDRAI)．AⅡ9speciescanbediscriminatedaca眦diIIgtotherelevantbaIIdiIIgpatterns． method wasnotaffectedbyindividua1q．．whichcollectedfromdifferentplacesanddifferenthostplants．rI1leresults indicatedt}Iatthemethodisreliableforthediscriminationofinterceptedfruitflyatportofentry． Keywords Quarantinefruitfly．PCR—RF1P，mtDNA 摘要 应用PCR—RFLP技术，对我国口岸截获频率较高的9种检疫性实蝇开展了快速鉴 定方法的研究，结果表明，设计的2对引物对9种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片 断大小分别约为350bp和450bp。用限制性内切酶MSE1和DRAI对PCR扩增产物进行酶切， 得到的酶切位点可将供试的9种实蝇区分开来。该方法不受供试实蝇地理来源及食物源的影 响，对各种虫态(卵、幼虫、蛹)和不同性别的成虫均适用，可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴 定。 ． 关键词 检疫性实蝇 PcR-RFLP mtDNA 实蝇是危害水果和蔬菜的重要害虫类 称幼体)随其寄主果实做远距离传播，口岸截 群，由于实蝇的发生不仅会给当地果蔬生产 获的实蝇多数是幼体，在实际检疫鉴定工作 造成严重损失，而且还将严重影响果蔬的出 中，由于缺乏针对实蝇幼体的鉴定方法，常要 口贸易，因此，实蝇倍受世界各国检疫部门高 将截获的实蝇幼体培养，直到羽化出成虫后 度关注，其在检疫上具有重要地位。实蝇主 才能作准确鉴定。 要以幼期阶段的虫体(包括卵、幼虫和蛹，下 分子生物技术，如PCR、RAPD、PCR-RFLP 本研究获广东检验检疫局项目(GKD14—2OO1)和广东省科技厅项目(2oo4moyolOO6)资助。 收稿日期：20O4—06—10 — 2 一 维普资讯 2005年第J期 植物检疫 PLANTQUARANTINE 等技术，可以有效解决形态特征无法解决的 快速、准确鉴定技术。 部分问题，特别适用于外部形态相似的种类、 1 材