草原红牛群体中微卫星DNA多态性的研究.pdfVIP

维普资讯 动物医学进展 ．2004，25(5)：I10—113 ProgressinVeterinaryM edicine 草原红牛群体中微卫星DNA 多态性的研究 杨 国忠 ，任文陟 ，张嘉保 ，赵玉民。，胡成华。，张国梁。 (1．河北北方学院牧工系，河北张家口075131；2．中国人民解放军军需大学军事兽医系，吉林长春 130062} 3．吉林省农科院畜牧分院，吉林公主岭 136100) 中圈分类号 ：$823．8~Q523 文献标识码：A 文章螭号：1007—5038(2004)05—0110—04 摘 要 ：选用草原红牛42头作为试验牛群体 ，经 酶 K、RNAase、Tris饱 和酚、Tris、EDTA、DNAMark- 过牛血液基 因组 DNA 的提取 、8对微卫星引物 er，N、N 一亚 甲双丙烯酰胺、TEMED、尿素、过硫酸铵、 的PCR扩增、扩增产物的聚丙烯酰胺 电泳分型、丙烯酰胺、硝酸银、亲水硅烷、疏水硅烷、引物等。 1I1_3 主要仪器 PCR仪、高速冷冻离心机、核酸测 UVmAND计算机凝胶成像分析 系统分析各位 序电泳仪、电泳仪、紫外透射反射分析仪、电子天平等。 点等 位 基 因及 全 部 个 体 的标 记 基 因型、 1．2 方 法 PPAP3．0软件计 算基 因频率、多态信 息含量 1I2．1基因组DNA的提取参照 《分子克隆实验指南 。 (PIC)和杂合度等步骤 ，从分子水平上分析 了草 1．2．2 引物的筛选与合成 参考国内外相关研究结 原红牛在 8个位点的遗传多态性。结果表 明，果，选出5条染色体上的8个与某些牛种生产性能相关 ETH225、IDVGA2、IDVGA46和 IDVGA44等 的微卫星位点。自牛的微卫星数据库 ，查出相应的微卫 位基 因数分别为 5、4、3和 4，多态信 息含量分别 星引物序列，引物由北京鼎国生物技术发展中心和赛百 为 0．5420，0．6736，0．5218和 O．575O，这 4个 胜生物技术公司合成。8个微卫星位点的引物序列及 位点为高度多态位点。而另 4个位点BM2113、PCR扩增反应条件见表 1。 1_2．3 PCR扩增程序：94℃预变性 5min--~94℃变性 BM1824、IDVGA55和 TGLA44等位基 因数分 3Os一退火 45s一72℃延伸 45S，再反复进行 35个循 另q2、2、2和 5，多态信 息含量分别为 0．3698， 环后 72℃延伸 10min。 0．3604，0．3538和 0．4708，属于中度多态性位 1I2．4 PCR产物的检测及 电泳分型 扩增产物先在 点。8个位点作为遗传标记应用于草原红牛遗 15g／L琼脂糖凝胶上电泳，并以核酸分子量标准作对 传育种研 究之 中是可行的。 照，在紫外透射分析仪上观察是否有所需的条带，若有 关键词：草原红牛；微卫星DNA；遗传多态性 继续转到 8 变性聚丙烯酰胺凝胶胶上电泳分型。采 近年来，随着现代分子生物学技术的发展，一些高 用银染法经过固定 漂洗、染色、显影、终止及清洗等步 效的分子遗传标记将各种畜禽的遗传图谱研究推向深 骤进行染色，便得到凝胶图。拍照保存 以判定基因型。 入，为将复杂的数量性状分解为多个数量性状基因座进 1．2．5 基因型的判定 用凝胶成像系统携带的UVI_ 行定位分析，提供了研究单个基因特性的手段，为动物 BANDVersion99软件中的Mw—RF功能分析计算全 育种从数量性状的表型操作深入到基