血红蛋白在膜分离过程中的氧化规律和抗氧化探索.pdfVIP

第 5 卷第 6 期 过 程 工 程 学 报 Vol.5 No.6 2005 年 12 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2005 血红蛋白在膜分离过程中的氧化规律和抗氧化探索 1,2 1 1 1 1 1 1 石晓东 , 路秀玲 , 郑春杨 , 于鹏展 , 索晓燕 , 王永权 , 苏志国 (1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080; 2. 北京科技大学土木与环境工程学院，北京 100083) 摘 要：脱离了红细胞的血红蛋白(Hb)在溶液中易被氧化成高铁血红蛋白(MetHb)，失去载氧活性. 实验发现，当对红 细胞裂解液进行微孔膜分离时，高铁血红蛋白增加不多；但在用层析法去除超氧化物歧化酶等其他红细胞蛋白后再进 行超滤膜浓缩血红蛋白时，则出现较多的血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白的现象，其氧化反应随超滤过程膜表面流体 切向速度的增加而加快，随溶液温度的增加而加快. 抗氧化剂的存在能有效地降低高铁血红蛋白的生成，谷胱甘肽 (GSH)、半胱氨酸、N−乙酰半胱氨酸、亚硫酸钠、抗坏血酸(Vc)在溶液中和超滤过程中都能起到对血红蛋白载氧活性 的保护作用. 其中 Vc 的效果最好，最适加入量(摩尔比)Vc/Hb 8, pH 8. 将抗氧化的优化条件整合到从红细胞裂解液开 始到超滤浓缩血红蛋白的整个流程，在离子交换层析后，添加 Vc 作为抗氧化剂进行超滤浓缩，Hb 活性得到了很好的 保护，MetHb 的含量控制在2.3% ，成功地制备了低MetHb 含量的纯化血红蛋白. 关键词：血红蛋白；膜分离；载氧活性；高铁血红蛋白；抗氧化剂 中图分类号：TQ028 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2005)06−0659−06 素 C(Vc). 对抗氧化的过程进行了优化，探索了还原剂 1 前 言 加入量、溶液 pH 值等的影响，测量了血红蛋白的载氧 以血红蛋白(Hb)为基础的红细胞代用品能够缓解 曲线和希尔(Hill)系数以及高铁血红蛋白的含量. [1] 血源紧缺及病毒污染等问题，已成为国际研究的热点 . 膜分离是大量制备高纯度血红蛋白的重要步骤. 通常血 2 材料与方法 红蛋白经过微滤(MF)膜去除细胞碎片和超滤(UF)膜去 2.1 材料 除小分子杂质之后，需采用层析进一步纯化. 层析后的 2.1.1 原料及试剂 溶液仍需用超滤浓缩更换缓冲液，以用于后续的血红蛋 [2]. 但膜分离过程往往会造成蛋白质的失活，是 新鲜牛血采自当地屠宰场，加入适量的柠檬酸钠抗 白修饰 凝. 还原剂 GSH, Cys, N−A−Cys 为分析纯试剂，Sigma 一个亟待解决的问题. 公司产品；亚硫酸钠、Vc 为国产分析纯试剂，其余化 血红蛋白是有 4 个亚基和 4 个卟啉环的复杂蛋白 学试剂均为分析纯. 实验用水是由美国 Millipore 公司 质，在脱离红细胞后容易解聚成为αβ二聚体，同时卟啉 RiOs 超纯水系统处理得到的超