中药DNA条形码鉴定中DNA提取方法研究.pdfVIP

世界科学技术— 中医药现代化★中药研究 中药DNA 条形码鉴定中的 DNA 提取方法研究＊ □罗 焜 马 培 姚 辉 宋经元＊＊ 中国医学科学院 （ 药用植物研究所/濒危药材繁育国家工程实验室 北京 100091） 北京协和医学院 湖 北 中 医 药 大 学 药 学 院 陈科力 刘义梅 （ 武汉 430065） 省部共建中药资源与中药复方教育部重点实验室 摘 要：目的：建立一种直接从药材中提取DNA 的方法以满足中药材DNA 条形码研究的需要。方 法: 以麦冬药材为实验对象，对比5 种常用植物DNA 提取方法，筛选出最优方法后，对不同部位入药 的10 种中药材进行DNA 提取，采用琼脂糖凝胶电泳及PCR 扩增效果进行检测。结果：改良的CTAB 法 较适合药材DNA 提取，虽然所有样品DNA 都出现降解，但基于ITS2 序列引物PCR 扩增成功率为 90% 。结论：通过增加药材的预处理、核分离液等步骤，并改良CTAB 浓度等措施，CTAB 法能够用于上 述不同药用部位入药的9 种药材DNA 提取，可以为中药DNA 条形码鉴定中的DNA 提取提供参考。 关键词：中药DNA 条形码 DNA 提取 CTAB 法 doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2012.02.020 我国现已查明药用植物超过 11000 种，其种类繁 2009 年，陈士林等通过对6000 余份药用植物样本进 多、来源复杂，药材市场上存在大量不同替代品混 行DNA 条形码序列筛选，表明ITS2 序列的鉴定能力 用，不同地区同名异物入药，紧俏药材使用其近缘植 优于国际条形码协会植物工作组推荐的rbcL+matK [1] 物入药，甚至使用其它伪品假冒名贵药材的现象 。 组合，首次提出将ITS2 序列作为药用植物鉴定的通 而性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等传统中药鉴定方 用DNA 条形码，并建立了以ITS2 为核心，psbA-trnH [9，10] 法受到遗传因素、生物体的生长发育阶段、环境条件、 为补充序列的药用植物条形码鉴定体系 。随后陈 人类活动等影响，具有很大的变异性，存在主观性强、 士林等进一步在豆科、蔷薇科、芸香科、忍冬科、重楼 [2~5] 重复性和稳定性差等缺点 。近年来，利用基因组中 属、石斛属等多个药用植物重点科、属证明了ITS2 和 标准的短DNA 片段进行物种鉴定的DNA 条形码技 psbA-trnH 序列的鉴定能力，并扩大研究范围在超过 [6~8] 术，已成为生物分类、鉴定研究的热点和新方向 。 5 万份植物样本和超过 1 万份动物样本中发现ITS2 [11，20] 序列同样具有较好的鉴定效果 。 目前，