定量蛋白质组学中同位素标记技术.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2005, 25 ( 12) : 56 ～6 1 技术与方法 定量蛋白质组学中的同位素标记技术 叶　雯 　刘凯于 　洪华珠 　刘丽君 (华中师范大学教育部农药与化学生物学重点实验室 　武汉 　430079) 摘要 　定量蛋白质组学的目的是对复杂的混合体系中所有的蛋白质进行鉴定 ,并对蛋白质的量 及量的变化进行准确的测定 ,是当前系统生物科学研究的重要内容 。近年来 , 由于质谱技术和生 物信息学的进步 ,定量蛋白质组学在分析蛋白质组或亚蛋白质组方面已取得了令人瞩 目的成就 , 但其最显著的成就应该归功于稳定同位素标记技术的应用 。该技术使用针对某一类蛋白具有特 异性的化学探针来标记 目的蛋白质或肽段 , 同时化学探针要求含有用以精确定量的稳定同位素 信号 。在此基础上 ,实现了对表达的蛋白质差异和翻译后修饰的蛋白质差异进行精确定量分析 。 综述了在定量蛋白质组学中使用的各种同位素标记技术及其应用 。 关键词 　同位素标记 　翻译后修饰 　定量蛋白质组学 　　随着多个物种基因组测序的完成 ,人们逐渐认识 的差别 ,而不在于测定其绝对的浓度 [ 2 , 3 ] 。目前发展起 到单纯从基因组信息并不能完全揭示生命活动的规 来的策略之二是 , 从全蛋白质组学的研究转向亚蛋 白 律 。基因在转录 、翻译后产生蛋白质的过程中,存在着 质组学的研究 , 即选择分离一些特异性的蛋 白质亚群 ( 转录水平 、翻译水平的调控 , 同时还存在着蛋白质的翻 进行分析 。通常 ,可以利用蛋白质的物理化学特性 如 ) 译后修饰 ,而且不同组织 、不同的分化程度 ,在不同的 大小、电荷 、疏水性 对蛋白质进行二维或三维层析或 环境下 ,生物体所表达的蛋白质是不同的。因此 , 蛋白 电泳分离 ,或是通过密度梯度离心等方案分离细胞器 , ( 质组学应运而生 ,其核心在于系统地识别一个细胞或 或是使用特异的化学探针选择性标记部分蛋白 如磷 ) 组织中表达的每一种蛋白质 。定量蛋白质组学就是把 酸化蛋白、糖基化蛋白 , 并通过化学探针的特异性对 一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系 标记蛋白进行分离 ,分离后使用 M S进行分析 。 中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定 。目前 ,对复 1　选择性标记特异氨基酸 [ 1 ] ( ) 杂体系中的蛋白质进行定量主要有两种方法 : 1 结 　　定量蛋白质组学的发展 目前主要集中在基于蛋白 ( ) 合 2 D E 和质谱 m a ss sp ectrom etry, M S 技术及蛋 白质 数据信息技术对凝胶上 的蛋 白质进行分析和鉴定 。 质或肽的稳定同位素标记 以及 自动化串联质谱技术 ,